鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。其临诊特征是呼吸困难、发出罗音、咳嗽、张口呼吸、打喷嚏。如果病原不是肾病变型毒株或不发生并发病,死亡率一般很低。产蛋鸡感染通常变现产蛋量降低,蛋的品质下降。本病广泛流行于世界各地,是养鸡业的重要疫病。下面我们就一起来了解一下:鸡传染性支气管炎的临床症状鸡传染性支气管炎的防控措施。
1、病原及流行病学
鸡传染性支气管炎病毒属冠状病毒科,冠状病毒属,鸡是唯一的宿主,各日龄的鸡都易感,但以6周龄以下的雏鸡患病后临床症状表现的较为明显。该病一年四季都会发生,但以冬季较为严重。鸡气管上皮细胞对该病毒有很高的易感性。鸡传染性支气管炎可分为呼吸型、肾型、腺胃型,该病具有传染期较短,传播速度迅速的特点,可在48h内使鸡群陆续出现感染症状。此病主要传染方式为病毒从感染的鸡的气管内咳出或者经由粪便排出而污染工具、饲料、饮水、垫料和工作人员,易感鸡通过接触这些污染物而发生感染。另外,该病毒还会经由空气传播,因此即使严格隔离的鸡舍也很难防止传染性支气管炎病毒的入侵。此病传染与应激有着密切的关系,通风换气不到位、接种不当、温度不适宜、饲养密度大、营养物质缺乏等,都可引发此病。
2、临床症状
呼吸型。该类型在前期无明显症状,突然出现呼吸困难,并可迅速导致全群发病。病鸡常表现为张口伸颈呼吸、打喷嚏、甩头,呼吸时有咕噜声,在夜间更为严重。个别严重病例会出现犬坐姿势。病鸡的鼻窦肿胀,有流动的液性鼻涕,眼泪多。随着病情的发展,病鸡表现为全身衰弱,精神不佳,食欲减退,羽毛松乱无光泽,呈昏睡状,双翅下垂,畏冷,常挤在一起取暖。病程一般为3~14天,小日龄雏鸡死亡率较高,大日龄的死亡数较少,病鸡在康复后会产生一定的免疫力。幼龄蛋鸡感染该病毒后输卵管会出现永久性的退化而丧失产蛋性能。成年蛋鸡除了会出现呼吸道症状外,还会增加产畸形蛋、软壳蛋、粗壳蛋的数量,并且蛋清稀薄,蛋的质量下降,产蛋率下降,即使康复后产蛋率也恢复不到病前的水平。
肾型。20~40日龄的鸡为易感群体,死亡率一般为20%~300/。在发病早期可见一次性呼吸道症状,表现为呼吸困难,轻微的咳嗽,因症状不明显易被忽略。随着病情的发展,病鸡的饮水量增加,食欲减退甚至废绝,生长缓慢甚至停滞,逐渐的消瘦,精神沉郁,最后会衰竭死亡。有的病鸡会排大量的稀便,并且粪便内有未消化的饲料和白色的尿酸盐,导致病鸡的肛门附近粘有粪便。
腺胃型。多发生在20-110日龄的鸡身上,病程一般为10-25天,病鸡会出现呼吸道的症状,精神和食欲均较差,腹泻,病鸡逐渐消瘦,死亡较为缓慢,发生陆续的死亡。
3、病理变化
呼吸型病死鸡可见鼻腔、鼻窦、咽喉、气管、支气管黏膜潮红、充血,有大量稀薄或黏性渗出物。病程稍长者的渗出物为黄白色豆腐渣干酪样,可在气管后部或支气管内形成栓条状堵塞物,使气道变窄,甚至不通;气囊壁混浊;肺脏局部有炎性病灶。蛋鸡的卵泡充血、变形,输卵管缩短变细,管腔变窄。
肾型病死鸡的鸡冠、肉髯为暗红色,因腹泻而出现严重的脱水现象导致皮下干燥。肾脏高度肿大、苍白,肾小管内有尿酸盐,使肾呈“花斑状”。输尿管内有尿酸盐沉积,引起输尿管扩张、增粗。有些严重病例在腹膜、腹腔器官表面、心包、胸膜、胸腹气囊表面及泄殖腔内,也可见尿酸盐沉积。
腺胃型病死鸡的病理变化主要以腺胃的变化最特征,腺胃肿胀明显,有的可呈圆形。胃壁增厚,腺胃乳头周围溃疡出血。
4、鉴别诊断
对该病进行诊断时可依据流行病学、临床症状、病理变化,同时结合实验室检查来进行确诊,在对该病进行诊断时要注意与其他类似疾病相区分,以防止贻误病情,耽误最佳治疗时机。进行实验室诊断可使用血清中和试验来诊断。
5、防控措施
因该病为病毒病,临床上并没有特效药来治疗,因此主要以预防为主,做好日常的饲养管理工作,加强消毒是预防此病的重点,但是传染性支气管炎为高度接触性的疾病,要防止鸡群不受侵害,难度非常大,因此选择使用疫苗接种的方法可起到有效的预防作用。用于鸡传染性支气管炎的预防性疫苗主要为H120和H52,H120用于首次免疫,H52用于二次免疫,接种方法可使用饮水、点眼和滴鼻。要想达到理想的预防效果,需要不断的从病鸡中分离病毒,以确定本场或本地区的血清型,使用相应的血清型疫苗接种效果更好。
发生该病后要及时给予抗生素,主要目的是防止发生继发性的感染,增加日粮中维生素的含量,合理的配制日粮,对于呼吸型可使用中药止咳化痰平喘,结合使用抗菌类药物如土霉素、强力霉素等,同时舍内要封闭养殖,进行气雾给药,让药物直达患处,效果更好一些。对于肾型则主要是以恢复肾功能为主,可使用肾肿解毒的中成药,同时减少日粮中蛋白质的含量,停止使用对肾有损伤的药物。
病原
传染性支气管炎病毒属于尼多病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属、冠状病毒Ⅲ群的成员。本病毒对环境抵抗力不强,对普通消毒药过敏,对低温有一定的抵抗力。传染性支气管炎病毒具有很强的变异性,目前世界上已分离出30多个血清型。在这些毒株中多数能使气管产生特异性病变,但也有些毒株能引起肾脏病变和生殖道病变。
本病主要通过空气传播,也可以通过饲料、饮水、垫料等传播。饲养密度过大、多热、过冷、通风不良等可诱发本病。1日龄雏鸡感染时刻使输卵管发生永久性的损伤,使其不能达到应有的产量。
本病感染鸡,无明显的品种差异。各种日龄的鸡都易感,但5周龄内的鸡症状较明显,死亡率可到15~19%。发病季节多见于秋末至次年春末,但以冬季最为严重。环境因素主要是冷、热、拥挤、通风不良,特别是强烈的应激作用如疫苗接种、转群等可诱发该病发生。传播方式主要是通过空气传播。此外,人员、用具及饲料等也是传播媒介。本病传播迅速,常在1~2天内波及全群。一般认为本病不能通过种蛋垂直传播。
症状
本病自然感染的潜伏期为36小时或更长一些。本病的发病率高,雏鸡的死亡率可达25%以上,但6周龄以上的死亡率一般不高,病程一般多为1~2周,雏鸡、产蛋鸡、肾病变型的症状不尽相同,现分述如下:
(1)雏鸡:无前驱症状,全群几乎同时突然发病。最初表现呼吸道症状,流鼻涕、流泪、鼻肿胀、咳嗽、打喷嚏、伸颈张口喘气。夜间听到明显嘶哑的叫声。随着病情发展,症状加重,缩头闭目、垂翅挤堆、食欲不振、饮欲增加,如治疗不及时,有个别死亡现象。
(2)产蛋鸡:表现轻微的呼吸困难、咳嗽、气管罗音,有“呼噜”声。精神不振、减食、拉黄色稀粪,症状不很严重,有极少数死亡。发病第2天产蛋开始下降,1~2周下降到最低点,有时产蛋率可降到一半,并产软蛋和畸形蛋,蛋清变稀,蛋清与蛋黄分离,种蛋的孵化率也降低。产蛋量回升情况与鸡的日龄有关,产蛋高峰的成年母鸡,如果饲养管理较好,经两个月基本可恢复到原来水平,但老龄母鸡发生此病,产蛋量大幅下降,很难恢复到原来的水平,可考虑及早淘汰。
(3)肾病变型:多发于20~50日龄的幼鸡。在感染肾病变型的传染性支气管炎毒株时,由于肾脏功能的损害,病鸡除有呼吸道症状外,还可引起肾炎和肠炎。肾型支气管炎的症状呈二相性:第一阶段有几天呼吸道症状,随后又有几天症状消失的“康复”阶段;第二阶段就开始排水样白色或绿色粪便,并含有大量尿酸盐。病鸡失水,表现虚弱嗜睡,鸡冠褪色或呈紫兰色。肾病变型传染性支气管炎病程一般比呼吸器官型稍长(12~20天),死亡率也高(20~30%)。
病变
主要病变在呼吸道。在鼻腔、气管、支气管内,可见有淡黄色半透明的浆液性、粘液性渗出物,病程稍长的变为干酪样物质并形成栓子。气囊可能浑浊或含有干酪性渗出物。产蛋母鸡卵泡充血、出血或变形;输卵管短粗、肥厚,局部充血、坏死。雏鸡感染本病则输卵管损害时永久性的,长大后一般不能产蛋。肾病变型支气管炎除呼吸器官病变外,可见肾肿大、苍白,肾小管内尿酸盐沉积而扩张,肾呈花斑状,输尿管尿酸盐沉积而变粗。心、肝表面也有沉积的尿酸盐似一层白霜。有时可见法氏囊有炎症和出血症状。
防治措施预防
本病预防应考虑减少诱发因素,提高鸡只的免疫力。清洗和消毒鸡舍后,引进无传染性支气管炎病疫情鸡场的鸡苗,搞好雏鸡饲养管理,鸡舍注意通风换气,防止过于拥挤,注意保温,适当补充雏鸡日粮中的维生素和矿物质,制定合理的免疫程序。
治疗
对传染性支气管炎目前尚无有效的治疗方法,人们常用中西医结合的对症疗法。由于实际生产中鸡群常并发细菌性疾病,故采用一些抗菌药物有时显得有效。对肾病变型传染性支气管炎的病鸡,有人采用口服补液盐、0.5%碳酸氢钠、维生素C等药物投喂能起到一定的效果。
1、发病时,可用龙达三肽每套可注射1000羽成禽,2000羽初禽,一般注射一次即可。饮水每套500羽成禽、1000羽初禽集中3—4小时饮完,一般饮水一次即可、病情严重者饮水两天、一天一次。并用抗菌药物防止继发感染。饲养管理用具及鸡舍要进行消毒。病愈鸡不可与易感鸡混群饲养。
2、咳喘康,开水煎汁半小时后,加入冷开水20-25公斤作饮水,连服5-7天。同时,每25公斤饲料或50公斤水中再加入盐酸吗啉胍原粉50克,效果更佳。
3、每克强力霉素原粉加水10-20公斤任其自饮,连服3-5天。
4、每公斤饲料拌入病毒灵1.5克、板蓝根冲剂30克,任雏鸡自由采食,少数病重鸡单独饲养,并辅以少量雪梨糖浆,连服3-5天,可收到良好效果
5、咳喘敏、阿奇喘定等有特效。
疫苗接种
疫苗接种是目前预防传染性支气管炎的一项主要措施。目前用于预防传染性支气管炎的疫苗种类很多,可分为灭活苗和弱毒苗两类。
①灭活苗:采用本地分离的病毒株制备灭活苗是一种很有效的方法,但由于生产条件的限制,因此,目前未被广泛应用。
②弱毒苗:单价弱毒苗目前应用较为广泛的是引进荷兰的H120、H52株。H120对14日龄雏鸡安全有效,免疫3周保护率达90%;H52对14日龄以下的鸡会引起严重反应,不宜使用,但对90~120日龄的鸡却安全,故目前常用的程序为H120于10日龄、H52于30~45日龄接种。
新城疫、传染性支气管炎的二联苗由于存在着传染性支气管炎病毒在鸡体内对新城疫病毒有干扰的问题,所以在理论上和实践上对此种疫苗的使用价值一直存有争议,但由于使用上较方便,并节省资金,故应用者也较多。
肉牛传染性鼻气管炎也叫做坏死性鼻炎,是由于感染牛传染性鼻气管炎病毒而引发的一种病毒性疾病。肉牛感染病毒后,会呈现潜伏感染或者持续性感染,导致病牛长时间甚至终生携带或者排出病毒,很难彻底控制或者消灭该病,造成较高的死亡率,严重损害养牛业的经济效益,应采取有效的防治措施。下面就一起来看看:肉牛传染性鼻气管炎的临床症状肉牛传染性鼻气管炎的防治措施。
1、发病特点
在自然感染的条件下,只有牛对该病具有易感性,通常是育肥肉牛容易发生。该病往往呈急性发生,具有传染性,主要导致病牛发热。该病的主要传染源是病牛和带毒牛,尤其是恢复期的病牛能够长时间带毒,对其他健康的易感牛群造成严重威胁。病毒主要经由眼、鼻以及精液、阴道的分泌物排到体外,当易感牛与带毒牛进行交配或者接触的空气飞沫污染有病毒,就会通过生殖道或者呼吸道进行传播,且吸血昆虫也能够作为该病的传播媒介。
2、主要临床症状
呼吸系统感染。一般在冬季比较容易发生,病牛发病初期出现高热,体温升高达到39.5-42℃,精神非常萎靡,停止采食,出现脓性鼻漏而排出大量黏液,鼻黏膜严重充血,形成浅表性溃疡,发生结膜炎,并大量流泪,鼻镜及鼻窦由于组织严重发炎。病牛往往由于鼻孔被炎性渗出物阻塞而导致呼吸困难,并出现张口呼吸,且由于鼻黏膜发生坏死导致呼出的气体中往往散发臭味。呼吸道黏膜明显发炎,呼吸急促,并伴发深部支气管性咳嗽,存在浅表性溃疡,有黏液脓性渗出物覆盖在上面,并散发腐臭味,包括咽喉、大支气管以及气管,可能发生成片的化脓性肺炎。症状严重的病牛,在数小时内就会发生死亡,大部分病程能够持续超过10天。
眼炎。病牛主要症状是角膜炎、结膜炎,结膜发生水肿、充血,并能够出现灰色的粒状坏死膜;角膜变得略微浑浊,但不会形成溃疡;眼、鼻会流出浆液性分泌物。病牛通常不会表现出明显的全身反应,基本不会发生死亡。
脑膜脑炎。病牛体温明显升高,能够超过40℃,初期精神萎靡,随后过度兴奋,出现惊厥,有白沫从口吐出,最后倒地不起,出现磨牙、角弓反张、四肢划动等症状,病程持续时间较短,主要是犊牛容易发生,具有非常高的死亡率。
生殖道感染。母牛感染病毒后具有1~3天的潜伏期。发病初期,病牛表现出发热,精神萎靡,食欲废绝。频繁排尿,伴有痛感,泌乳量减少,有黏液从阴户流出,并使周围的皮肤被污染,阴门、阴道出现充血、发炎,有一定量黏稠状的黏液性分泌物从阴道流出,但不会散发臭味的。阴门黏膜上存在白色的小病灶,能够形成脓包,且大量的小脓包会导致阴户前庭及阴道壁上覆盖一层灰色坏死膜,将其擦掉或者自行脱落就会出现擦破的发红表皮,接着在急性期消退并开始逐渐愈合,在10-14天后即可恢复。
3、实验室诊断
病原鉴定。对于感染不同类型的病牛,要在相应的部位采集病料,如出现呼吸道型症状,要对处于发热期的病牛用棉拭子采集眼分泌物和鼻液;出现脑膜脑炎型症状,应采集脑组织;出现阴道炎症状,要采集阴道分泌物和外阴部黏膜;出现流产症状,要采集流产胎儿的心血、心包液、胸水以及肺脏等实质器官。采集的病料要马上添加到Hanks液内(其中含有10%犊牛血清,且每毫升还含有500万IU青霉素、500g链霉素),在冷藏条件下及早送到实验室用于分离病毒。一般使用牛胎肾单层细胞培养物进行病毒分离,或者通过荧光抗体法、中和试验来鉴定病毒,或者采取PCR、核酸探针检测、电镜检查等方法对病原进行鉴定。
血清学检测。诊断该病的血清学方法主要包括血清中和试验(SN)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血凝试验、核酸探针检测技术、琼脂扩散试验以及变态反应检查等。其中El_ISA反应是目前使用比较广泛的一种方法,具有操作简单、特异性好的优点,常在实验室用于检测病毒抗体。
4、防治措施
疫苗免疫。如果牛场已经感染该病,则要对全群牛采取血清病毒中和试验,对于检测结果呈阴性的牛按疫苗规定剂量肌肉注射牛传染性鼻气管炎弱毒苗。如果牛场无法进行血清中和试验,则要给病牛、妊娠后期母牛、临产母牛之外的所有牛都注射牛传染性鼻气管炎疫苗,对于没有注射疫苗的母牛要在分娩后1个月接种牛传染性鼻气管炎疫苗。对于育成牛,通常在配种前或者配种后进行疫苗接种,每6个月进行1次;犊牛在4~5月龄进行疫苗接种,每6个月进行1次。对于接种牛传染性鼻气管炎疫苗的全部牛,要在第1次接种疫苗后经过28天再进行1次疫苗接种。
对症治疗。目前,该病还没有特异性的治疗方式,主要是给病牛采取干扰素疗法或者使用抗病毒药来抑制病毒复制,并使用广谱抗生素来避免出现继发感染,如使用青霉素避免继发引起支气管肺炎。
简介
急性IBRV呼吸道感染还可以继发细菌性肺炎。此病目前在世界范围内流行,对乳牛的产奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有较大影响。20世纪50年代初,以传染性鼻气管炎症状为特征的疾病最先见于美国科罗拉多州的育肥牛群,随后相继出现于洛杉矶和加利福尼亚等地,并命名为牛传染性鼻气管炎(简称IBR)。Madin等于1956年首次从患牛分离到病毒后,一些研究者相继从病牛的结膜(1961)、外阴(1959)、大脑(1962)和流产胎儿(1964)中分离出病毒。Huck于1964年确认牛鼻气管炎病毒属于疱疹病毒。1980年我国从新西兰进口奶牛中首次报道该病,并分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒,随后经血清学调查证实,我国广东、广西、河北、河南、上海、山东、四川、甘肃、新疆、黑龙江和青海等省市的黑白花乳牛、本地黄牛、水牛或牦牛均有IBR病毒存在。在一些交通极不便利的地区,IBR病毒抗体阳性率极高。
病原学
牛传染性鼻气管炎(IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)或牛疱疹病毒I型(BHV-Ⅰ)引起,IBRV在分类地位上属疱疹病毒科a疱疹病毒亚科。该病毒呈球形,带囊膜,成熟病毒粒子的直径约150~220nm,主要由核心、衣壳和囊膜三部分组成。核心由双股DNA与蛋白质缠绕而成,包含基因组的核衣壳为立体对称的正二十面体,外观呈六角形,有162个壳粒,周围为一层含脂质的囊膜。双股DNA分子量为8.4x106,其中G+C含量为72%,浮密度为1.731g/cm。IBRV基因组是138Kb的线性双股DNA分子,分成特异长区(UL,106Kb)和短区(US,10Kb),后者被两个反向重复序列(IRS,TRS各为11Kb)包围,因而短区能够反转方向,使病毒DNA具有两种异构体。据测IBRV基因组可编码大约70个蛋白质,其结构和功能目前大部分已知,存在于病毒囊膜的gB、gC、gD和gE四个主要精蛋白基因已经测序并在哺乳动物中表达。gB在哺乳动物细胞中的表达显示出引起细胞融合和多核体的形成,对病毒复制是必需的;gC对病毒吸附组织培养细胞是重要的,但它在牛细胞内的表达并不影响病毒蚀斑的数量和病毒的存在;gD被认为是病毒粒子表面和病毒感染细胞的主要分子,抗体糖蛋白的单克隆抗体在病毒吸附后中和病毒并显示出较高的中和滴度,表明gD可能参与病毒进入细胞,并为病毒复制非必需基因。鼠和牛的免疫试验显示出gD能够引起比gB、gC更强和持久的细胞免疫。
诊断
本病的典型病例(上呼吸道炎)具有鼻黏膜充血、脓疱、呼吸困难、鼻腔流脓等特征性症状,结合流行病学,可做出初步诊断,但确诊必须依靠实验室诊断,包括病毒分离鉴定和血清学试验。通常检测血清样品中BHV1抗体的方法有病毒中和试验(VN)和各种酶联免疫吸附试验(ELISA)。另外,还有琼脂扩散试验和间接血凝试验。因为IBRV感染后一般发生病毒潜伏,所以,鉴定血清学中阳性动物是检查动物感染状态非常有用而且理想的指标。抗体阳性动物可认为是病毒携带者和潜在的间歇性排毒者,从初乳获得母源抗体的犊牛和经灭活疫苗免疫的非感染牛除外。
(一)病毒中和试验
中和试验是以测定病毒的感染力为基础的,以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据,判定免疫血清中和病毒的能力。它被认为是血清抗体检测最标准的方法。IBRV只有1个血清型,只要有1个已知标准毒株的免疫血清,通过在敏感细胞培养后所进行的中和试验就可以作出鉴定,但该方法存在费时费力、试验周期长、易受不确定因素影响,如病毒毒价的准确性、细胞量的多少及生长情况、病毒/血清孵育时间长短不同等因素将直接影响中和试验的结果,目前在检疫中逐步被酶联免疫吸附试验(ELISA)所替代。
(二)ELISA
ELISA法是将酶与抗原结合成酶标记物,这些酶标记物仍保持原有的免疫学活性和酶的活性,它可与吸附在固相载体上的抗体发生特异性结合,滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体量呈正比,此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定。ELISA法因其具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点,在大批量动物进口时作为首选方法被推广使用,但经长期应用发现,目前市场上已商品化的ELISA试剂盒或多或少存在有质量问题,出现假阳性或假阴性的几率较大,很难确保检疫质量,而且进口的试剂盒价格普遍偏高,无形中又增加了检疫的成本。
(三)琼脂扩散试验
可用已知的IBR抗原检查被检血清中的沉淀抗体,也可用IBR阳性血清来检测病料标本或细胞培养物中的相应抗原。
(四)间接血凝试验
将已知抗原结合在鞣酸处理的绵羊红细胞上,采用常规的试管凝集法或微量凝集法来检查被检测血清中的相应抗体,这是一种简便、快速、实用的诊断方法。由于IBRV有潜伏感染性,自然感染病牛中和抗体滴度在感染2周时才达到高峰,并且在持续2周或4周后即逐渐下降,且可能降到零,进入潜伏感染期。此后,一旦应激因素刺激,抗体滴度又上升,并排毒,如此反复,IBR感染牛的抗体滴度也随之呈现波浪式的起伏。因此,即便通过中和试验或ELISA法判定牛群IBR抗体呈阴性反应,仍难保证牛群确无IBRV感染。由此可认为,要确定1个牛群是否有IBRV感染的最根本的方法应当是检测IBR抗原。
(五)病毒分离鉴定
1.样品的收集和处理:从早期感染牛采集鼻腔拭子。对于外阴道炎和**炎病例,采取生殖道拭子,用拭子在生殖道阴道黏膜表面上用力刮取,**可用生理盐水冲洗包皮,收集其洗液。所有样品均应悬浮于运输培养基(含抗生素和2%犊牛血清的组织培养液),储存于4℃,并迅速送达实验室。样品送到实验室后,将拭子在运输培养基中充分搅动以便将病毒洗脱,室温放置30min再取出拭子,将运输液1500r/min离心10min,取上清液用作病毒分离的样品。用做病毒分离的精液需经特殊处理,因为精液中含有对细胞有毒或对病毒增殖有抑制作用的酶和其它因子。
2.病毒分离:多种细胞可用于IBRV分离,牛胎儿肺、鼻甲或气管等组织制备的细胞株及已建立的传代细胞系(如MDBK细胞)都比较合适。当使用24孔塑料培养板时,每孔需接种细胞培养物上清液100μl~200μl,吸附1h后倾去液体,然后,加入维持液。每天观察细胞病变情况,一般于接种后3d出现细胞病变现象(CPE)。细胞的典型变化是圆缩,聚集成葡萄样群落,在单层细胞上形成空洞,有时会发现有数个细胞核的巨大细胞。若7d还不出现CPE,应再盲传1次,将培养物经反复冻溶后离心,取其上清液用于接种新的单层细胞做进一步病毒分离。为鉴定致细胞病变的病毒是否为IBRV,细胞培养的上清液必须与单特异IBRV抗血清或单克隆抗体(MAb)作中和试验。
(六)免疫荧光试验
用来检查眼结膜触片、组织切片和细胞培养物涂片中的IBRV。
(七)PCR法
1993年,Vilcek将聚合酶链式反应(PCR)方法用于IBR的诊断。试验证明,PCR比病毒分离更加敏感,阳性检出率比病毒分离高出5倍。甚至可检出3个分子的病毒。由于其具有很高的灵敏度而能够在检测牛血清中微量的IBRV等方面得到重要应用。因此,将PCR技术应用到进出境牛的传染性鼻气管炎病毒的检疫,将会大大降低检疫成本和检疫周期,并有效的提高检出率,为打破贸易技术壁垒、促进我国外贸事业的进一步发展,保护我国畜牧业生产的安全发挥出极大的作用。
临诊症状
自然感染潜伏期一般为4-6天,人工感染(气管内、鼻内、阴道滴注接种)时,潜伏期可缩短至18-72小时,可表现以下临诊类型:
(一)鼻气管炎最常见的症状,有轻有重。病初高热(40-42℃),精神萎顿,厌食,流泪,流涎,流粘脓性鼻液。母牛乳产量突然下降。鼻粘膜高度充血,呈火红色,并出现浅的、粘膜坏死。呼吸高度困难,呼出气体恶臭,咳嗽不常见。一般经10-14天左右症状消失。
(二)传染性脓疱性阴道炎病初轻度发热,食欲无影响,产奶量无明显改变。动物表现不安,频尿,排尿时因疼痛而尾部高举。外阴和阴道粘膜充血潮红,有时粘膜上面散在有灰黄色、粟粒大的脓疱,阴道内见有多量的粘脓性分泌物。重症病例,阴道粘膜被覆伪膜,并见有溃疡。孕牛一般不发生流产。病程约2周左右。
(三)传染性龟头包皮炎龟头、包皮、阴茎等充血,有时可见阴茎弯曲或形成溃疡等。多数病例见有精囊腺变性、坏死。通常在出现病变后一周开始痊愈,彻底痊愈需两周左右。若为种公牛,患病后3-4月间,失去配种能力,但可成为传染源,应及时淘汰。
(四)角膜结膜炎多与上呼吸道炎症合并发生,病初由于眼睑水肿和眼结膜高度充血,流泪,角膜轻度混浊,一般无溃疡,无明显的全身反应。重症病例,可见眼结膜形成灰黄色针头大颗粒,致使眼睑粘着和眼结膜外翻。眼、鼻流浆性或脓性分泌物。
(五)流产一般见于初胎青年母牛怀孕期的任何阶段,有时亦见于经产牛。常于怀孕的第5-8个月发生流产,多无前驱症状,约有50%流产牛见有胎衣滞留,流产胎儿不见有特征性肉眼病变。
(六)肠炎生后2-3周的犊牛感染不娠妊的原因。
上述症状往往不同程度的同时存在,很少单独发生。
发病机理及病理变化
病毒常常经上呼吸道粘膜、生殖道粘膜侵入,还可经眼结膜上皮和软壳蜱侵入,是否经口腔感染仍未证实。经上呼吸道入侵的病毒沿粘膜、神经纤维、淋巴管扩散到邻近部位引起上呼吸道炎症、结膜炎。虽然血液的细胞成分在病毒复制、扩散中起重要作用,但很少观察到病毒血症。在病毒血症期间,病毒可侵入呼吸道深部、中枢神经系统、胎犊中,在这些部位引起病变,表现发热性全身性呼吸器官疾病、脑膜脑炎或流产。因条件致病菌易在发炎的粘膜中繁殖,所以有时还可能发生继发性炎症病变如肺炎。
呼吸道病变表现在上呼吸道粘膜的炎症,窦内充满渗出物,粘膜上覆有粘脓性、恶臭的渗出物组成的伪膜。在极少数病例,肺小叶间水肿,一般不发生肺炎。组织学检查,粘膜面可见嗜中性粒细胞浸润,粘膜下层有淋巴细胞、巨噬细胞及浆细胞的浸润。在疾病早期,气管上皮细胞内见有CowdryA型包涵体。
受侵害的消化道表现颊粘膜、唇、齿龈和硬腭溃疡(与粘膜病不同),在食道、前胃、真胃也可见同样的病变,肠表现卡他性炎症。组织学检查,上皮细胞空泡变性,派伊尔结(Peyer’spatches)坏死,肝可见坏死灶、核内包涵体。
生殖道型的病例,表现外阴、阴道、宫颈粘膜、包皮、阴茎粘膜的炎症,一些病例可发生子宫内膜炎。组织学检查,见有坏死灶区积聚大量嗜中性白细胞,坏死灶周围组织有淋巴细胞浸润,并能检出包涵体。
流产胎儿体内所见的肉眼变化,几乎是由于死后所致。组织学检查,在肝、肺、脾、胸腺、淋巴结和肾等脏器常发生弥漫性的灶状坏死。由于胎儿物均系死后排出,因机体自溶,包涵体多已消失,很难检出。
患有脑膜脑炎的病例,除脑膜轻度充血外,眼观上无明显变化。组织学检查可见淋巴细胞性脑膜炎及由单核细胞形成血管套为主的病变。
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