隋国香
（黑龙江省嫩江县畜牧兽医局畜牧站161499）
1胚胎因素
胚胎采集。采胚方法可选择输卵管采集法和子宫采集法。输卵管采集法一般是在供体母羊受精后前4天使用，尽管具有很高的回收率，但术后非常容易导致卵巢和输卵管伞出现黏连，从而使卵子以后的接收和运行过程受到影响，如果出现双侧同时黏连的现象，甚至可能使其终生无法受孕。目前，通常采用子宫采集法收集胚胎，通常在受精后的第6天进行，虽然这种方式的回收率比输卵管回收略低，但收集胚胎的胚龄稍大，同时经过子宫环境的自然选择，即使有一些胚胎可能发生退化，但移植存活的胚胎后能够使受体母羊具有很高的妊娠率。
胚胎形态。正常胚胎的形态是透明带完整、外观饱满，卵间隙较小，卵裂球界限清晰、大小均匀，同时细胞质也很均匀，没有明显的颗粒状物。如果胚胎发育不正常，其透明带发生变形，外观不圆整，卵间隙较大，卵裂球界限不清楚，细胞质比较浑浊，存在破碎的块状物。通常来说，胚胎具有正常的形态和发育时期，移植后具有较大的可能性发育成活。但是并不是指形态稍差的胚胎完全不能够用于移植胚胎，这是由于胚胎早期的调整性较大，一些小的缺陷能够在之后发育过程中进行弥补，然后再继续发育。因此，只要胚胎具有形态基本正常的卵裂球，即使形态存在一些其他问题，也能够用于移植，常常也能够使受体母羊受孕。
胚胎移植的部位。在胚胎移植过程中，移植的部位要根据胚胎的实际日龄以及采集前所在的部位来确定。通常来说，胚胎移植部位要与采集胚胎的部位相对应。在输卵管内移入胚胎时，在其深部移人具有较高的受胎率。在子宫角移人胚胎时，在子宫角项部也就是输卵管一侧的子宫角接合处附近移人5～6日龄的胚胎的存活率要高于移入到子宫角中部，之后随着胚胎日龄的增长，胚胎的移植部位也要相应的朝子宫角基部移动。一般来说，母羊发情后的第7天卵巢静脉内的孕酮浓度达到最高，并且能够相对恒定地持续到第15天，因此使母羊发情期的后段，受体与供体将有可能存在一段幅度较大的同步时间，这样能够保证移植成功率较大。
2.受体母羊
对受体母羊进行选择时，以选细毛绵羊为最好，这是由于细毛绵羊具有较强的季节性发情。胚胎移植通常选择在9～12月份进行，此时细毛绵羊机体正处于体质健壮、精力旺盛的阶段，能够使移植妊娠率较高。而其他品种母羊具有较差的同期发情性，因此导致黄体形成不一致的成熟度。另外，受体母羊最好选择已经生产一胎以上的经产母羊，年龄是2～4岁。如果受体母羊年龄较大，大部分会由于子宫内膜发生损伤、体质较差等原因而导致移植受胎率受到影响。另外，受体母羊在进行胚胎移植的前后必须加强饲养管理，这是由于受体母羊饲养管理的好坏直接与受胎率存在关系，也就是受体母羊胚胎移植前后的营养状况是否适宜会对整个生殖过程产生直接影响。如果受体母羊膘情良好，大多数胚胎着床后都能够正常发育成活。但如果营养条件较差，不利于胚胎着床和羔羊产出后的生长，使受体胚胎移植效果明显降低。
3移植操作
移植胚胎时可采取手术法或者非手术法。采取手术法移植胚胎能够损伤供体母羊，导致卵巢、子宫以及周围组织出现黏连，从而使优良种母羊重复使用的次数减少，不过采取腹腔镜技术进行非手术移植能够将这些缺点克服。据报道，当供、受体母羊的非同期发情时间在8h以内，采取腹腔镜移植胚胎的妊娠率基本上与正规手术法移植相同。但是要在生产实践中推广非手术法胚胎移植，还需要对操作技术进一步熟练，使用的仪器设备还要不断改进，如此才能使妊娠率提高效率。供体和受体母羊术后必须进行精心护理，尽可能防止发生应激反应。供体母羊术后发情属于正常现象，但受体母羊正好与之相反，如果术后出现发情，说明没有成功妊娠，也就是移植失败，这可能是由于胚胎在移植过程中丢失或移植后死亡造成。
4应激因素
在胚胎移植过程中，受体母羊如果改变饲养管理，或者气候温度发生改变，或者手术前的处于饥饿状态等，这些应激因素都能够导致机体出现非特异性应答反应，引起其体内的黄体出现退化，进而对胚胎的正常着床和发育产生影响。如果受体母羊处于持续的应激情况下，机体内的胎盘激素、褪黑素会失去活性，进而影响黄体状态，最终使胚胎的生存受到影响。另外，如果温度过高，能够使受体母羊减少分泌孕酮及促乳素，造成胚胎迟缓发育，甚至可能中止妊娠。因此，胚胎移植最好不要在7～9月份温度过高的阶段进行。
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良种肉羊冷冻胚胎移植效果研究
引进良种肉羊冷冻胚胎进行移植生产良种肉羊，可以节省引进活体良种肉羊的费用，减少引种过程带人疾病的风险，加速国内肉羊的优质化进程。目前国外应用冷冻胚胎移植技术进行肉羊良种扩繁及品种改良已经和人工授精技术一样达到了普遍推广应用阶段。下面我们就一起来具体了解一下这项：良种肉羊冷冻胚胎移植效果研究。
1、材料与方法
1.1胚胎
胚胎来源于南非肉用美利奴、黑头杜泊和白头杜？白冷冻优质肉羊胚胎。胚胎均采用1.5mol／L甘油作为抗冻保护剂，解冻后三步法脱出冷冻剂后进行胚胎移植。
1.2受体羊
受体为黑龙江省畜牧研究所试验羊场和甘南县恒泰牧业有限公司饲养的小尾寒羊。选择标准为发情周期正常的2～3岁，空怀，无生殖道疾病，膘情良好的经产母羊。受体用CIDR+PG方法进行同情化处理。在发情后第6.5～7.5天，采用腹腔镜移植技术将胚胎移植到有黄体侧子宫角。
1.3胚胎解冻
从液氮中取出冷冻胚胎细管，在空气中停留10s，然后投入30℃水浴10s，将胚胎从细管中推出，用三步法脱除冷冻保护剂：6%甘油+0.33mol／L蔗糖5min;；3%甘油+0.33mol/L蔗糖5min;Holding液5min。
1.4移植过程
受体羊选择发情第7±0.5天（发情日为O天）的经产小尾寒羊母羊，在腹腔镜进行子宫移植，冻胚经脱出防冻剂甘油后，移植到黄体侧子宫角，每只受体母羊移植1枚胚胎。
2.、移植结果
3、讨论
从表1中可以看出，通过移植冷冻胚胎，获得良种并创造羊冷冻胚胎移植产羔率新纪录。移植受胎率很高，均超过了70%，达到国际先进水平，创造了羊冷冻胚胎移植的新纪录。移植技术、经验值得推广和借鉴。
在胚胎移植期间，共解冻胚胎86枚，移植84枚，有2个装有胚胎的0.25mL塑料细管，在解冻过程中细管棉塞端崩出，导致细管中的大半数液体及胚胎丢失，造成了浪费。采用的解决办法：在解冻胚胎过程中，胚胎从液氮罐中取出时，尽量快速的将细管轻轻甩一下‘2]，将细管棉塞端的液氮甩出去后，再投入30～32℃的水浴中解冻，或者在解冻时，采用镊子夹紧棉塞端就可以避免冷冻胚胎解冻时细管的爆裂而造成的经济损失。
分批解冻进口A、B级胚胎，在移植前要重新进行胚胎形态学质量等级鉴定，合格的胚胎才进行胚胎移植。经鉴定该批次进口的冷冻胚胎可用率达到100%。证明该批次进口的冷冻胚胎质量是优质而可信赖的。
将A级胚胎移植到比供体早发情的受体中时（7.5天），胚胎移植妊娠率没有差异；质量稍差的B级胚胎移植到比供体晚发情的受体时（6.5天），胚胎移植妊娠率没有差异。由于质量稍差的B级胚胎发育迟缓，移植到比供体晚发情的受体时，受体可以为胚胎提供了适宜该发育阶段胚胎的子宫环境。在进行胚胎移植时，考虑供、受体母羊的同期性和胚胎的质量两者的兼顾是很重要的。
影响移植受胎率的因素是多方面的，应仔细操作。但笔者认为移植技术人员的经验、技术水平、受体母羊的选择、受体母羊的饲养管理水平等，是影响胚胎移植受胎率的主要因素。
胚胎移植出生后的羔羊，个别羔羊体质较弱，需要重点看护，确保成活。移植的这些良种肉羊对加速我国肉羊良种化水平，提高饲养肉羊的经济效益具有重要意义。
提高肉羊胚胎移植妊娠率的综合方法
羊的胚胎移植技术是通过采用外源激素对优秀供体母羊进行超排处理，在胚胎发育早期从子宫内将胚胎取出，在体外处理后，再移植到另一只同种的经过同期化的受体羊内，使其在受体内发育成新个体，直至分娩。羊胚胎移植可极大地提高优秀供体母羊的利用率，是羊的纯种繁育、快速扩繁及提高优质种羊繁殖率的重要措施之一，同时可使种羊实现批量同期生产，便于饲养管理，提高成活率，降低生产成本。羊的胚胎移植过程是系统的复杂的生物工程，任何一个环节因素都直接影响胚胎移植效果，现主要从以下几方面来探讨提高羊的胚胎移植妊娠率。
1胚胎因素
1.1供体的选择
提供胚胎的母畜称为供体，选择合适的供体肉羊是移植成功与否的前提和基础。选择经济价值和育种价值较高，健康无病，生殖机能正常，结构较好，体型外貌符合品种要求，遗传性能稳定，年龄在2～5岁的优质肉羊。
1.2供体羊的友情鉴定及人工授精
供体超数排卵后，用试情公羊进行试情，试情时间不少于30min。如果供体羊呜叫、精神不安、食欲减退、阴道流出大量黏液、主动接受试情羊的爬跨或爬跨试情羊并追随公羊者为发情。
精液要求来源于同品种公羊，公羊谱系健全，遗传性能稳定，生产性能优良，精液品质良好。
确认发情后，即进行第一次输精，之后每隔12h输精1次，共输精3～4次直至供体不再表现发情为止。
公羊精子在母羊体内保持活力的持续时间为24—48h，而卵子排出后，保持有受精能力的持续时间为12～16h，所以做到适时发情、适时输精是非常关键的。否则会造成难以受精或即使受精也会出现早期胚胎退化等现象，因而影响胚胎的质量。
1.3胚胎采集
手术冲胚时，术者手臂及手术部位周围羊毛要刮净，皮肤要消毒，与胚胎接触的一切器具、冲卵液等都要进行消毒灭菌处理，防止污染胚胎，尽量做到无菌操作；冲卵液要事先预热，防止对胚胎形成冷应激。
1.4胚胎的保存
鲜胚移植时，胚胎在体外保存时间最好不要超过2h，以降低外环境的不良影响，提高移植受胎率。如果确有其他因素影响，不能及时移植，胚胎需要保存较长时间，应每隔2h换1次胚胎保存液，保存温度不宜太高，要缓慢降温至20～25℃保存。
2.受体因素
2..1受体的选择
接受胚胎的母畜称为受体，受体羊是胚胎移植成功的基础。选择适应性强，体型较大，泌乳能力强，膘情中等，体质强健，繁殖率高，无生殖道疾病，可繁殖的2～4岁的经产母羊，老龄羊及单胎品种羊处理效果较差，一般可选择经产的小尾寒羊作为受体。
2..2供、受体的同期化程度
供、受体羊的同期发情水平是影响移植妊娠率的关键因素。在胚胎移植中，供体母羊和受体母羊两者生殖系统处于相同的生理状态，胚胎才能在受体母羊内继续发育生长，这就需要供体和受体发情时间吻合，二者子宫环境一致。供体和受体的同步发情差越小，受胎率越高，一般选择供体与受体同步发情差在±12h以内，移植妊娠率较高。
2..3受体的饲养管理
受体羊手术前2个月应进行强化饲养。在胚胎移植的前期和后期，要保持均衡的营养水平和良好的体况，防止过肥或过瘦，蛋白质饲料、能量饲料、矿物质饲料、维生素等要合理搭配，不要随意变换，避免长途运输、意外惊吓、变换环境，防止出现应激反应。防止饲喂腐败变质的饲草饲料，还要注意防疫和驱虫。在受体进行同期发情处理前，要完成所有疫苗接种和驱虫工作。在胚胎移植期间，不要随意使用抗寄生虫类药物和疫苗等，避免一些药物对胚胎形成和发育造成影响。
对术后羊只进行精心管理，除了注射必要的抗感染药物外，还应随时观察羊的采食、排泄情况，必要时，还要测量体温、检查伤口。发现感染，立即采取措施。受体羊随着胎儿的发育，对营养的需求量增加，尤其是怀孕后期，不仅要供给足够的营养丰富的精、粗饲料，还要注意矿物元素和维生素A、维生素D、维生素E的供给，特别是胡萝卜的补充，圈舍保持清洁、干燥，饲养密度不宜太大，避免引起流产。
3技术因素
胚胎移植操作技术人员必须既要有胚胎移植的理论知识，又要有较为熟练的外科手术经验，操作规范、移植位置适宜、动作迅速、胚胎体外停留时间短，受胎率高。实践证明，通过子宫角采集的6～7日龄的胚胎，要比通过输卵管采集的3日龄以内的胚胎受胎率高，且供体羊不易发生黏连，胚胎移植效果较好。
4环境因素
4.1无菌操作
手术前要对所有接触胚胎的手术器械、液体、培养皿等进行严格的消毒处理。实验室要彻底清洁并用紫外线灯照射消毒。手术人员术前进行手臂消毒并穿戴无菌工作衣、帽、口罩和手套。
4.2移植季节
羊的发情周期受光照和温度影响，具有季节性。在繁殖季节，母羊的卵巢处于活动状态，卵泡发育才能成熟，表现正常发情；在非繁殖季节母，羊的卵巢机能活动处于静止状态，不表现发情和排卵。因此，胚胎移植的适宜季节应依据当地的气候变化、羊的发情状况来选择，胚胎移植应在羊的发情季节来进行。当外界温度超过30℃时，母羊繁殖的一系列过程都会受到影响，最后会导致胚胎移植失败。所以胚胎移植最好避开高温季节，集中在羊的繁殖季节进行，实践证明，温度适宜的秋季受体胚胎移植效果最佳，其次是春季，冬季和夏季不宜实施胚胎移植手术。
4.3移植温度
移植手术室和检胚操作室的温差要尽可能缩小，检胚操作室的温度应控制在20～25℃。避免温差大影响胚胎质量，从而影响移植妊娠率。
5小结
胚胎移植技术作为良种肉羊快速繁育的重要手段，在生产实践中得到了一定的推广应用，但还没有完全达到产业化阶段，这是因为胚胎移植操作环节复杂，影响妊娠率的因素比较多，妊娠率还较低，相信随着人们对这些因素的不断研究和一一解决，胚胎移植技术一定能在羊的育种中发挥更大的作用。
影响亲鳖产卵的因素
1．外界因素对亲鳖产卵的影响：亲鳖产卵与温度密切相关，一般从交配到产卵结束，共历时100余天。产卵期内，水温28～32℃为亲鳖产卵的最适温度，因此，“芒种”到“大暑”为产卵盛期。当8月气温、水温均升到32℃以上时，产卵量随之下降，气温、水温超过35℃时，则产卵基本停止。
由于各地气候条件不同，亲鳖产卵的差异也很大。在台湾，亲鳖年产卵次数最多可达9次，每次产卵数枚至数十枚。尤其亲鳖每次产卵的枚数各地差异更大。
另外，亲鳖的产卵还与当地气候条件的变化有关，雨后晴天或久晴雨后产卵较多，而刮风下雨、阴雨连绵的天气，或天气过于干燥、水分蒸发量大以及温度骤然升降变化，产卵均会停止。其次如产卵场或产卵沙盘的泥沙板结，亲鳖挖穴困难，也会导致产卵停止。
2．个体产卵差异与饲养管理的影响：亲鳖的产卵次数、前后产卵间隔时间、每次产卵的枚数及单枚卵的重量，除与温度及其它气候条件有关外，也与亲鳖的年龄、饵料质量、饵料充足与否及管理情况有直接关系。一般一只亲鳖每年产卵3～5次，每次产卵数枚至数十枚，单卵重2.5～6.58克，龄高、个体肥大健壮的雌鳖，年产卵次数多、每次产卵数量多，卵粒也大。饲养管理好的每年产卵在5次以上，每次产卵数多的可达30枚；饲养管理差的，1年产1次，只产卵2～5枚。同一只雌鳖产卵，前、后两次产卵间隔时间一般为15天左右，但时间短的为10天，而长的则1个月有余。
3．人工控制亲鳖产卵：为方便鳖卵的收集和集中人工孵化，采用人工催产的方法，使亲鳖的产卵时间相对集中。通常注射鱼用促排卵素2号（LRH-A）和绒毛膜促性腺激素（HCG），在产卵期到来之前或在产卵期中，可每隔10～15天注射1次。每次剂量HCG：雌鳖7500国际单位，雄鳖2500国际单位；LRH-A：雌鳖75～150微克，雄鳖75微克。经人工催产的亲鳖比未经催产的一般要提前4～9天产卵，提前4～8天结束产卵。经催产的亲鳖产卵期为40～60天，而未经催产的鳖产卵期是40～70天。
