良种肉羊冷冻胚胎移植效果研究

3、讨论

从表1中可以看出，通过移植冷冻胚胎，获得良种并创造羊冷冻胚胎移植产羔率新纪录。移植受胎率很高，均超过了70%，达到国际先进水平，创造了羊冷冻胚胎移植的新纪录。移植技术、经验值得推广和借鉴。

在胚胎移植期间，共解冻胚胎86枚，移植84枚，有2个装有胚胎的0.25mL塑料细管，在解冻过程中细管棉塞端崩出，导致细管中的大半数液体及胚胎丢失，造成了浪费。采用的解决办法：在解冻胚胎过程中，胚胎从液氮罐中取出时，尽量快速的将细管轻轻甩一下‘2]，将细管棉塞端的液氮甩出去后，再投入30～32℃的水浴中解冻，或者在解冻时，采用镊子夹紧棉塞端就可以避免冷冻胚胎解冻时细管的爆裂而造成的经济损失。

分批解冻进口A、B级胚胎，在移植前要重新进行胚胎形态学质量等级鉴定，合格的胚胎才进行胚胎移植。经鉴定该批次进口的冷冻胚胎可用率达到100%。证明该批次进口的冷冻胚胎质量是优质而可信赖的。

将A级胚胎移植到比供体早发情的受体中时（7.5天），胚胎移植妊娠率没有差异；质量稍差的B级胚胎移植到比供体晚发情的受体时（6.5天），胚胎移植妊娠率没有差异。由于质量稍差的B级胚胎发育迟缓，移植到比供体晚发情的受体时，受体可以为胚胎提供了适宜该发育阶段胚胎的子宫环境。在进行胚胎移植时，考虑供、受体母羊的同期性和胚胎的质量两者的兼顾是很重要的。

影响移植受胎率的因素是多方面的，应仔细操作。但笔者认为移植技术人员的经验、技术水平、受体母羊的选择、受体母羊的饲养管理水平等，是影响胚胎移植受胎率的主要因素。

胚胎移植出生后的羔羊，个别羔羊体质较弱，需要重点看护，确保成活。移植的这些良种肉羊对加速我国肉羊良种化水平，提高饲养肉羊的经济效益具有重要意义。

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提高肉羊胚胎移植妊娠率的综合方法

羊的胚胎移植技术是通过采用外源激素对优秀供体母羊进行超排处理，在胚胎发育早期从子宫内将胚胎取出，在体外处理后，再移植到另一只同种的经过同期化的受体羊内，使其在受体内发育成新个体，直至分娩。羊胚胎移植可极大地提高优秀供体母羊的利用率，是羊的纯种繁育、快速扩繁及提高优质种羊繁殖率的重要措施之一，同时可使种羊实现批量同期生产，便于饲养管理，提高成活率，降低生产成本。羊的胚胎移植过程是系统的复杂的生物工程，任何一个环节因素都直接影响胚胎移植效果，现主要从以下几方面来探讨提高羊的胚胎移植妊娠率。

1胚胎因素

1.1供体的选择

提供胚胎的母畜称为供体，选择合适的供体肉羊是移植成功与否的前提和基础。选择经济价值和育种价值较高，健康无病，生殖机能正常，结构较好，体型外貌符合品种要求，遗传性能稳定，年龄在2～5岁的优质肉羊。

1.2供体羊的友情鉴定及人工授精

供体超数排卵后，用试情公羊进行试情，试情时间不少于30min。如果供体羊呜叫、精神不安、食欲减退、阴道流出大量黏液、主动接受试情羊的爬跨或爬跨试情羊并追随公羊者为发情。

精液要求来源于同品种公羊，公羊谱系健全，遗传性能稳定，生产性能优良，精液品质良好。

确认发情后，即进行第一次输精，之后每隔12h输精1次，共输精3～4次直至供体不再表现发情为止。

公羊精子在母羊体内保持活力的持续时间为24—48h，而卵子排出后，保持有受精能力的持续时间为12～16h，所以做到适时发情、适时输精是非常关键的。否则会造成难以受精或即使受精也会出现早期胚胎退化等现象，因而影响胚胎的质量。

1.3胚胎采集

手术冲胚时，术者手臂及手术部位周围羊毛要刮净，皮肤要消毒，与胚胎接触的一切器具、冲卵液等都要进行消毒灭菌处理，防止污染胚胎，尽量做到无菌操作；冲卵液要事先预热，防止对胚胎形成冷应激。

1.4胚胎的保存

鲜胚移植时，胚胎在体外保存时间最好不要超过2h，以降低外环境的不良影响，提高移植受胎率。如果确有其他因素影响，不能及时移植，胚胎需要保存较长时间，应每隔2h换1次胚胎保存液，保存温度不宜太高，要缓慢降温至20～25℃保存。

2.受体因素

2..1受体的选择

接受胚胎的母畜称为受体，受体羊是胚胎移植成功的基础。选择适应性强，体型较大，泌乳能力强，膘情中等，体质强健，繁殖率高，无生殖道疾病，可繁殖的2～4岁的经产母羊，老龄羊及单胎品种羊处理效果较差，一般可选择经产的小尾寒羊作为受体。

2..2供、受体的同期化程度

供、受体羊的同期发情水平是影响移植妊娠率的关键因素。在胚胎移植中，供体母羊和受体母羊两者生殖系统处于相同的生理状态，胚胎才能在受体母羊内继续发育生长，这就需要供体和受体发情时间吻合，二者子宫环境一致。供体和受体的同步发情差越小，受胎率越高，一般选择供体与受体同步发情差在±12h以内，移植妊娠率较高。

2..3受体的饲养管理

受体羊手术前2个月应进行强化饲养。在胚胎移植的前期和后期，要保持均衡的营养水平和良好的体况，防止过肥或过瘦，蛋白质饲料、能量饲料、矿物质饲料、维生素等要合理搭配，不要随意变换，避免长途运输、意外惊吓、变换环境，防止出现应激反应。防止饲喂腐败变质的饲草饲料，还要注意防疫和驱虫。在受体进行同期发情处理前，要完成所有疫苗接种和驱虫工作。在胚胎移植期间，不要随意使用抗寄生虫类药物和疫苗等，避免一些药物对胚胎形成和发育造成影响。

对术后羊只进行精心管理，除了注射必要的抗感染药物外，还应随时观察羊的采食、排泄情况，必要时，还要测量体温、检查伤口。发现感染，立即采取措施。受体羊随着胎儿的发育，对营养的需求量增加，尤其是怀孕后期，不仅要供给足够的营养丰富的精、粗饲料，还要注意矿物元素和维生素A、维生素D、维生素E的供给，特别是胡萝卜的补充，圈舍保持清洁、干燥，饲养密度不宜太大，避免引起流产。

3技术因素

胚胎移植操作技术人员必须既要有胚胎移植的理论知识，又要有较为熟练的外科手术经验，操作规范、移植位置适宜、动作迅速、胚胎体外停留时间短，受胎率高。实践证明，通过子宫角采集的6～7日龄的胚胎，要比通过输卵管采集的3日龄以内的胚胎受胎率高，且供体羊不易发生黏连，胚胎移植效果较好。

4环境因素

4.1无菌操作

手术前要对所有接触胚胎的手术器械、液体、培养皿等进行严格的消毒处理。实验室要彻底清洁并用紫外线灯照射消毒。手术人员术前进行手臂消毒并穿戴无菌工作衣、帽、口罩和手套。

4.2移植季节

羊的发情周期受光照和温度影响，具有季节性。在繁殖季节，母羊的卵巢处于活动状态，卵泡发育才能成熟，表现正常发情；在非繁殖季节母，羊的卵巢机能活动处于静止状态，不表现发情和排卵。因此，胚胎移植的适宜季节应依据当地的气候变化、羊的发情状况来选择，胚胎移植应在羊的发情季节来进行。当外界温度超过30℃时，母羊繁殖的一系列过程都会受到影响，最后会导致胚胎移植失败。所以胚胎移植最好避开高温季节，集中在羊的繁殖季节进行，实践证明，温度适宜的秋季受体胚胎移植效果最佳，其次是春季，冬季和夏季不宜实施胚胎移植手术。

4.3移植温度

移植手术室和检胚操作室的温差要尽可能缩小，检胚操作室的温度应控制在20～25℃。避免温差大影响胚胎质量，从而影响移植妊娠率。

5小结

胚胎移植技术作为良种肉羊快速繁育的重要手段，在生产实践中得到了一定的推广应用，但还没有完全达到产业化阶段，这是因为胚胎移植操作环节复杂，影响妊娠率的因素比较多，妊娠率还较低，相信随着人们对这些因素的不断研究和一一解决，胚胎移植技术一定能在羊的育种中发挥更大的作用。

影响肉绵羊胚胎移植的因素

隋国香

（黑龙江省嫩江县畜牧兽医局畜牧站161499）

1胚胎因素

胚胎采集。采胚方法可选择输卵管采集法和子宫采集法。输卵管采集法一般是在供体母羊受精后前4天使用，尽管具有很高的回收率，但术后非常容易导致卵巢和输卵管伞出现黏连，从而使卵子以后的接收和运行过程受到影响，如果出现双侧同时黏连的现象，甚至可能使其终生无法受孕。目前，通常采用子宫采集法收集胚胎，通常在受精后的第6天进行，虽然这种方式的回收率比输卵管回收略低，但收集胚胎的胚龄稍大，同时经过子宫环境的自然选择，即使有一些胚胎可能发生退化，但移植存活的胚胎后能够使受体母羊具有很高的妊娠率。

胚胎形态。正常胚胎的形态是透明带完整、外观饱满，卵间隙较小，卵裂球界限清晰、大小均匀，同时细胞质也很均匀，没有明显的颗粒状物。如果胚胎发育不正常，其透明带发生变形，外观不圆整，卵间隙较大，卵裂球界限不清楚，细胞质比较浑浊，存在破碎的块状物。通常来说，胚胎具有正常的形态和发育时期，移植后具有较大的可能性发育成活。但是并不是指形态稍差的胚胎完全不能够用于移植胚胎，这是由于胚胎早期的调整性较大，一些小的缺陷能够在之后发育过程中进行弥补，然后再继续发育。因此，只要胚胎具有形态基本正常的卵裂球，即使形态存在一些其他问题，也能够用于移植，常常也能够使受体母羊受孕。

胚胎移植的部位。在胚胎移植过程中，移植的部位要根据胚胎的实际日龄以及采集前所在的部位来确定。通常来说，胚胎移植部位要与采集胚胎的部位相对应。在输卵管内移入胚胎时，在其深部移人具有较高的受胎率。在子宫角移人胚胎时，在子宫角项部也就是输卵管一侧的子宫角接合处附近移人5～6日龄的胚胎的存活率要高于移入到子宫角中部，之后随着胚胎日龄的增长，胚胎的移植部位也要相应的朝子宫角基部移动。一般来说，母羊发情后的第7天卵巢静脉内的孕酮浓度达到最高，并且能够相对恒定地持续到第15天，因此使母羊发情期的后段，受体与供体将有可能存在一段幅度较大的同步时间，这样能够保证移植成功率较大。

2.受体母羊

对受体母羊进行选择时，以选细毛绵羊为最好，这是由于细毛绵羊具有较强的季节性发情。胚胎移植通常选择在9～12月份进行，此时细毛绵羊机体正处于体质健壮、精力旺盛的阶段，能够使移植妊娠率较高。而其他品种母羊具有较差的同期发情性，因此导致黄体形成不一致的成熟度。另外，受体母羊最好选择已经生产一胎以上的经产母羊，年龄是2～4岁。如果受体母羊年龄较大，大部分会由于子宫内膜发生损伤、体质较差等原因而导致移植受胎率受到影响。另外，受体母羊在进行胚胎移植的前后必须加强饲养管理，这是由于受体母羊饲养管理的好坏直接与受胎率存在关系，也就是受体母羊胚胎移植前后的营养状况是否适宜会对整个生殖过程产生直接影响。如果受体母羊膘情良好，大多数胚胎着床后都能够正常发育成活。但如果营养条件较差，不利于胚胎着床和羔羊产出后的生长，使受体胚胎移植效果明显降低。

3移植操作

移植胚胎时可采取手术法或者非手术法。采取手术法移植胚胎能够损伤供体母羊，导致卵巢、子宫以及周围组织出现黏连，从而使优良种母羊重复使用的次数减少，不过采取腹腔镜技术进行非手术移植能够将这些缺点克服。据报道，当供、受体母羊的非同期发情时间在8h以内，采取腹腔镜移植胚胎的妊娠率基本上与正规手术法移植相同。但是要在生产实践中推广非手术法胚胎移植，还需要对操作技术进一步熟练，使用的仪器设备还要不断改进，如此才能使妊娠率提高效率。供体和受体母羊术后必须进行精心护理，尽可能防止发生应激反应。供体母羊术后发情属于正常现象，但受体母羊正好与之相反，如果术后出现发情，说明没有成功妊娠，也就是移植失败，这可能是由于胚胎在移植过程中丢失或移植后死亡造成。

4应激因素

在胚胎移植过程中，受体母羊如果改变饲养管理，或者气候温度发生改变，或者手术前的处于饥饿状态等，这些应激因素都能够导致机体出现非特异性应答反应，引起其体内的黄体出现退化，进而对胚胎的正常着床和发育产生影响。如果受体母羊处于持续的应激情况下，机体内的胎盘激素、褪黑素会失去活性，进而影响黄体状态，最终使胚胎的生存受到影响。另外，如果温度过高，能够使受体母羊减少分泌孕酮及促乳素，造成胚胎迟缓发育，甚至可能中止妊娠。因此，胚胎移植最好不要在7～9月份温度过高的阶段进行。

奶牛胚胎移植技术要点 奶牛胚胎移植的注意事项

奶牛胚胎移植是将供体母牛配种后的胚胎取出后,移植到另一头或数头生理状况相似的受体母牛的生殖道内的适宜位置,使其继续发育。奶牛胚胎移植技术对于发挥优良奶牛品种的繁殖潜力、快速扩大优良种群等方面有重要的意义,现对这项技术做简单的介绍。下面一起来了解一下：奶牛胚胎移植技术要点奶牛胚胎移植的注意事项。

1、奶牛胚胎移植的意义

胚胎移植技术可以将优良奶牛品种的繁殖潜力充分的发挥，可加快种群的改良速度，扩大优良种群的数量。在自然条件下奶牛一年可产一胎，进行胚胎移植可以使母牛免去妊娠期，胚胎取出后不久奶牛即可再次的发情、排卵、配种和受精，可在一定的时间内产生较多的后代，并且可利用超数排卵技术，一次获得多枚胚胎，生产出更多的后代。胚胎移植技术还具有保存品种资源的作用，可将胚胎在液氮中长期保存，对于保存特定品种资源的意义重大；目前我国多从国外引进优良的奶牛品种养殖，或者与我国当地品种杂交以培育出更为优良的品种，利用此项技术可以代替活畜引种，不但运输方便，节省费用，还可以避免一些疾病的传播；另外，购买冷冰的胚胎可以降低购买费用与运输费用，奶牛养殖场不用饲养种公牛和种母牛，还节约了饲养和管理的费用。

2、奶牛胚胎移植技术要点

奶牛胚胎移植技术其实是将多种繁殖技术综合起来的一项技术，包括超数排卵、胚胎的采集、胚胎的保存和胚胎的移植。

超数排卵是指利用激素处理供体母牛使其发情，同时排出数量较多且发育成熟的卵子，然后再经人工授精的方法获得数量稳定的可移植胚胎。所使用的激素通常为促卵泡素、氯前列烯醇、孕马血清、前列腺素和绒毛膜促性腺激素，使用的激素不同，超排处理的时间也不相同。另外，超数排卵的数量与激素的剂量也有关，如果剂量过大，则排卵的数量过多，会导致卵巢功能受损，因此激素的剂量要适宜，一般以每头母牛排10个左右卵子为宜。要对经超排处理的母牛做好发情的鉴定工作，注意发情表现，确定最佳的人工授精时间，另外，可以增加奶牛人工授精的次数，提高超排卵子的受精率。

胚胎采集与保存。胚胎采集的时间通常安排在母牛发情后的3-7天，方法有手术法和非外科手术法。其中非外科手术法使用的较为普遍。采集胚胎使用的冲卵管为二路式，其主要的操作方法是先将母牛保定，让其站立。为了使母牛安静，便于操作，可使用局部麻醉或者低剂量的全身麻醉。掏出直肠内的粪便，然后对母牛的后躯以及阴门进行彻底且全面的消毒。在二路采卵管内插入不锈钢内芯，并将采卵管导入阴道内，到达阴道窟窿，另一手在直肠内协助。慢慢的将导管插入子宫体，到达子宫角内5cm左右时将采卵管内的内芯拔出约2cm，然后再让采卵管沿子宫角弯曲的方向进入子宫角深部，直到将采卵管达到子宫角适当的位置。将采卵管内的不锈钢内芯全部抽出，然后通过冲采卵管注入冲卵液，再将冲卵液回收后置于集卵杯内，静置30min后，吸去上部液体，剩下的冲卵液在显微镜检查，然后将其移入到培养液中保存。一般冲卵液与胚胎培养液是通用的，保存在零下20℃的环境下。

胚胎移植。目前奶牛生产中普遍使用的胚胎移植方法为非外科移植法。在移植前要先对冲出来的胚胎进行质量的评定，只有质量过关的胚胎才可用于移植。且于移植的胚胎要求发育与采集日期一致，形态正常，透明带完整，胚胎的结构清楚，细胞突出胚胎整体部分不超过胚胎总体积的1／5，移植的方法是采用直肠把握子宫颈输精法将胚胎注入到子宫角的深处。为了提高受胎率，可以重复移植。

3、奶牛胚胎移植注意事项

选择适宜的受体牛，要求受体牛的体型较大，性情温顺，一般以改良牛为宜，使用最多的是西门塔尔的杂交改良后代，年龄一般选择3-6岁的经产母牛，要求受体牛健康无病，体况适宜。做好受体母牛的发情鉴定工作，要在母牛的发情阶段适时胚胎移植。在移植前要对受体牛进行短期的优饲，提供营养丰富、品质优良的饲料，以使其达到最佳的繁殖状态。在移植前要做好操作环境的卫生与消毒工作，还要对一些器械、用具等进行全面的消毒，操作人员的双手和手臂也要消毒。移植前要对受体牛进行麻醉处理，注意掌握好麻醉的剂量，如果剂量过大会导致奶牛的后肢麻痹无法站立，无法移植。保证移植胚胎的质量是获得较高受胎率的关键，因此要做好胚胎的鉴定工作。在进行胚胎移植时最好避开高温和严寒的季节，最好选择在每年3-5月和10-11月进行，如果在高温季节移植则要选择在一天中较为凉爽的时段进行。在移植时要熟练的掌握操作技术，防止在移植的过程中损伤子宫内膜。

在胚胎移植后要注意让母牛充分的休息，避免剧烈的运动，以免造成子宫收缩。胚胎移植成功后母牛会出现妊娠反应，在饮食上要多注意。移植后半个月左右在清晨取晨尿进行检测，或者抽血检查是否移植成功。对于成功妊娠的母牛要做好保胎的工作。

奶牛胚胎移植技术
一、概述牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。
二、胚胎移植技术
1.体内受精胚的移植1超数排卵在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌FSH，而且还能分泌LH，因此商品FSH制剂中都含较高水平的LH，不同厂家或同一厂家不同批次FSH制剂中的LH含量差异很大，所以商品FSH制剂的超排效果很不稳定。从理论上讲，在卵泡发育的早期，只有FSH对卵泡生长起启动和刺激作用，LH不起作用。只有在卵泡发育的晚期，卵泡颗粒细胞才开始出现LH受体，此时LH和FSH才起协同作用，共同促进卵泡的进一步生长和类固醇激素的合成。LH和FSH的协同促卵泡生长作用必须有一个合适的比例，LH含量过高可以导致生长卵泡的闭锁或黄体化。这一机理就是商品FSH制剂超排效果不理想的重要原因之一，国内外的许多报道事例已经证明了这一点。目前，加拿大生产的超纯度FSH（商品名Follrtropin）是世界公认的最理想的牛用超排药物。用Follrtropin进行的大规模商业超排处理结果显示，平均A、B级胚胎数为8.8/枚头次，我们利用中科院动物所提纯生产的FSH，在北京十三个奶牛育种场进行了大规模超排试验，试验结果表明：该激素的超排效果有些批次的效果很好；有些批次效果不理想。另据报道，牛的超排效果和摄入的营养水平有很大关系。奶牛为产奶目的而饲喂的日粮一般为高蛋白低能量日粮，即蛋白水平一般为17%；但这种日粮不利于奶牛多出胚胎。为了使奶牛多出胚胎，应降低日粮的蛋白水平，增加能量水平，最理想的办法是在超排处理前两周时，将蛋白水平降至12%，同时补饲大麦、玉米等高能量饲料。此外，在超排前适当补充复合维生素制剂也有利于提高牛的超排效果。
超数排卵方法
超数排卵（超排）的目的时为了增加有活力卵子的数量。通常在供体牛发情周期的功能性黄体期，一般在母牛发情周期的9～14天，肌肉注射PMSG或者FSH，以刺激卵巢产生额外的卵泡。待处理后供体牛再次发情时静脉注射LH或者HCG，以诱导卵泡排卵。但对成年母牛一般不需要外源LH或者HCG。
近年来，由于前列腺素F2α及其类似物如前列烯醇在超排方法上的应用，增加了超排处理的机动性，可在供体母牛发情周期的功能性黄体期的任何一天处理，而且增加了可用胚胎的比例。母牛在PG注射后的2～3天大多出现发情。
对超排处理的供体牛输精需2～3次，间隔12h，每次的输精量要大于正常的输精量，应保证有足够的有效精子。
2．供体和受体牛的准备
供体牛选择的首要条件是其遗传学价值及其健康和繁殖情况，所以，确定供体前需作必要的检查，经确定后要加强饲养管理，观察发情，确定正确的发情周期。每头供体牛需要准备5头受体牛，两者的发情开始时间前后相差不超过一天。
在一般情况下，不易找出若干头自然发情与供体牛发情时间相同的受体牛，所以在胚胎移植时往往采用对供体与受体牛进行同期发情处理。同时对供体牛进行超数排卵处理。
3.胚胎移植
在胚胎移植中，胚胎最终必须移植到合适的受体牛中才能受胎妊娠，产下优秀后代，因此受体牛的准备非常重要。在准备受体牛时，除了无繁殖疾病等一般要求外，重点应该考虑发情同期性问题。一般来说，受体牛与供体牛发情同期差在4!天内时，即发情后第563天的受体牛受胎效果比较理想。许多研究结果证明，发情时间早于供体牛的受体牛，其移植受胎率高于发情时间晚于供体的受体牛，如发情后第3天的受体牛，其移植受胎率高于发情后第5天的受体牛。其原因可能是发情后第3天的受体牛，其黄体功能更完善。综上所述，要提高胚胎移植受胎率必须人同期性上选择合适的受体牛。此外，对于发情时间稍晚于供体胚胎日龄的受体（即不到发情后第七天的受体），注射孕酮有利于受胎。
4.妊娠诊断
（1）直肠检查法通常在移植后1.5～3.0个月进行直肠检查,此时子宫继续增大，落入腹腔，可感觉到胎儿的浮动，子宫角出现孕脉,子宫壁可以触到子叶。
（2）超声波诊断一般可在移植２５天后检查,利用探头通过直肠轻轻的在子宫角上滑动，在荧光屏上可观察到中间灰白色周围黑色的图象———胎儿。
（3）妊娠后的饲养管理在移植后70～90天对受体牛进行妊娠检查，对已妊娠的受体要加强饲养管理,避免应激反应。妊娠受体在产前3个月要补充足量的维生素、微量元素，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常发育，又要避免难产。根据当地的疾病发生情况，有目的地注射一些疫苗，以防胎儿流产或传染病发生。

褪黑素对肉羊体外胚胎生产效果的影响实验

卵母细胞与胚胎体外培养过程中，细胞处于相对高氧环境，常常会由于抗氧化防御不足而导致氧化应激，使细胞在发育过程中积累大量的活性氧，从而降低卵母细胞及胚胎的体外发育率。褪黑素作为一种有效的抗氧化剂和自由基清除剂，能显著降低细胞内ROS水平，清除细胞内自由基，改善卵母细胞的体外成熟与胚胎的体外发育历程。下面具体来了解一下：褪黑素对肉羊体外胚胎生产效果的影响实验。

1、材料与方法

1.1实验材料

屠体卵巢来源于羊屠宰场，摘取屠体羊卵巢后立即放于添加有双抗(1000lU／mL)的30℃生理盐水中，在2h内运回实验室。

1.2主要试剂

(1)抽卵液：TCM199(Hepes)+10%胎牛血清(FBS)+6IU／mL肝素+100IU／mL青、链霉素

(2)成熟培养液：TCM199+10%FBS—-10g/mL促卵泡激素(FSH)—-lug／ml)雌二醇(E2)+10ug／ml.促黄体素(LH)+10ng／mL表皮生长凶子(EGF)+0.1mmol／L半胱氨酸+1%PS

(3)受精液：SOF十6mg／mLBSA+20uL/ml.肝素钠+1%PS

(4)获能液：S()F+3mg／mLBSA—-2mg／mL咖啡凶+1%PS

(5)胚胎培养液I液：SOF—-3mg／mLBSA—-l%PS

(6)胚胎培养液Ⅱ液：SOF—-10%FBS+1%PS

1.3方法和步骤

1.3.1卵母细胞的采集

从屠宰场采集羊卵巢带回实验室，用无菌生理盐水清洗3次。抽取卵巢表面上直径为2～8mm的卵泡中的卵泡液，在体视显微镜下挑选具有完整卵丘细胞且胞质均匀的卵丘卵母细胞复合体(C()Cs)进行实验。

1.3.2卵母细胞体外成熟率的统计

培养成熟24h的卵母细胞，用O.l%透明质酸酶消化去除卵丘细胞。然后在体视显微镜下观察统计第一极体排出率（即卵母细胞成熟率）。

1.3.3囊胚细胞计数

收集体外受精培养至第7天的囊胚4～5枚，进行细胞核染色。具体步骤是：用PBS/PVP洗囊胚3次，用酸性台式液去除囊胚的透明带，后用PBS/PVP洗3次，冉移入3.7%多聚甲醛中室温固定3min，然后用PBS/PVP洗3次，放入配制好的10ug/ml』的Hoechst333/12染液中10min最后用PBS/PVP洗3次，囊胚置于载玻片中央，压片，封片，在倒置荧光显微镜下照相，统计囊胚细胞数日。1.4数据处理

试验重复3次，试验数据用Excel2003软件建立数据库进行数据整理，采用SPSS17.O软件对数据进行单因素方差分析，结果用平均值±标准差表示，以PO.05作为差异显著性判断标准。

2、实验结果

2..1褪黑素对肉羊卵母细胞成熟率（第一极体排出率）的影响

卵母细胞体外成熟液中添加10-Ⅱlol／L和lO-smol／L褪黑素，牛体外成熟卵母细胞成熟率显著高于对照组和10-10mol／L褪黑素处理组(PO.05)．而这两组之间没有显著差异(PO.05)。l0-1omol／L褪黑素处理组与对照组无显著差异(P0.05)。

2..2褪黑素对体外受精胚胎发育的影响

不同浓度褪黑素(lO-10mol／L、10-9mol／l.、lO-smol／L)对体外受精胚胎的卵裂率及囊胚率的影响不同。lO-smol／l.、10-9mol／l』褪黑素与对照组之间差异极显著(P0.01)，与10-10褪黑素组差异显著(P0.05)。而lO-8、lO-9mol／L褪黑素这两组之间的囊胚率没有显著差异(P0.05)。不同浓度的褪黑素组囊胚细胞数无显著差异(P0.05)，但褪黑素处理组的凋亡细胞比例显著低于对照组(P0.05)，10-acute;mol／L处理组的凋亡比例也显著低于lO-10mol／L组(P0.05)而l0-1omol／L和10-9mol／L褪黑素这两组之间

3、讨论

3.1褪黑素对卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞在体外成熟过程中不断发生氧化应激反应，而卵子在体内生长成熟过程中，卵巢中不断有抗氧化应激的物质产生清除过氧化物质。体外氧化损伤会导致卵母细胞发育阻滞，卵母细胞的体外成熟质量降低。本研究证明：在体外成熟过程中，外源添加抗氧化剂褪黑素的适宜添加浓度为10-91TIOl／L，卵母细胞的成熟率最高，卵裂率、囊胚率及囊胚活细胞数显著高于对照组。浓度过高会对细胞产生毒害作用，过低则不足以完全清除细胞氧化应激时产生的过氧化物，但也好于对照组。褪黑素除了具备抗氧化调节，辅助卵泡生长凶子的调节。

3.2褪黑素对体外受精的影响

在体外受精液中添加褪黑素显著降低了精子胞内ROS水平，受精后，精子携带的代谢产物ROS可能会对卵母细胞的胞质造成损伤减小。发生氧化损伤的精子人卵后，携带的脂质过氧化产物和DNA碎片等会损伤卵母细胞的胞质，影响体外受精率、受精后囊胚的发育能力口]。精子在体外操作过程中，会产生过量的ROS，并且精子在体外操作过程中，去除了精浆中部分的抗氧化系统，使精液调节氧化还原平衡的能力降低。为了提高冻后精子体外受精能力，国内外许多研究者将外源抗氧化剂添加到稀释液中来提高冻后精子质量，其中褪黑素能清除ROS，且能激活多种抗氧化系统，保护精子膜的脂质过氧化，延长精子存活时间，提高冻后精子质量。大量的精子聚集在成熟的卵母细胞周围会产生过量的自由基，影响胚胎的体外发育能力。本研究证明，外源填加抗氧化剂褪黑素可以提高体外受精后体外胚胎的卵裂率。

3.3褪黑素对体外发育胚胎质量的影响

胚胎发育早期对氧化应激非常敏感，由于体外胚胎抗氧化能力的不足，导致过量的ROS对细胞结构和功能产生毒害作用，从而表现发育阻滞、胚胎碎片现象。在体外条件下，胚胎内部调控机制的改变与外部环境的不适，是导致胚胎发育受阻的基本原凶。

本实验模拟体内环境，以期为科学研究和生产实践提供数量更多、质量更优的胚胎。本实验结果证明：体外胚胎培养液中添加褪黑素显著提高了体外受精胚胎的卵裂率和囊胚发育率，不同浓度的褪黑素对体外受精胚胎细胞凋亡的影响，褪黑素可以起到抗细胞凋亡的作用，但与对照组比较，差异不显著，同时高浓度的褪黑素会促进细胞的凋亡。

4、结论

在体外胚胎全程生产液中添加褪黑素促进发育相关基凶表达，最终显著改善卵母细胞胞质成熟质量。提高卵母细胞成熟率、体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数，降低胚胎细胞碎片量，提高胚胎的质量。

公羊冷冻精液技术的研究详情

随着国内羊产业养殖逐渐生产化需求,人工授精技术对提高动物、畜产品质和扩大数量起到积极重要作用,精液冷冻人工授精技术迫切需要应用于生产推广中。公羊冷冻精液的品质显得至关重要,与其相关的很多因素都能对其质量造成影响,其质量好坏对受胎率起决定性作用,所以要进一步深入研究公羊的精液冷冻技术。为此,本文简要介绍公羊精液稀释液中的营养成分、稀释方法、冷冻温度等因素对精液品质影响的研究概况,以对公羊精液冷冻保存技术提供理论参考。下面具体来看看：公羊冷冻精液技术的研究详情。

1、稀释液主要成分的影响

1.1糖类

糖在稀释液中具有多种作用可以增加稀释液的渗透压并且作为低温保护剂起作用，它的主要作用在于能够在亲水组织中替代水分子，而这一特性就可以对细胞在经历快速的温度变化过程中起到保护细胞膜的作用。另外，糖还可以通过增加稀释液的黏性来改变稀释液的有效性。这样能够防止冰晶的形成而且易于形成玻璃体化。

1.2卵黄

卵黄在稀释液中具备重要作用，具有防止精子冷休克，维持精子活力、保护精子顶体和线粒体膜等功能。Jone等研究证实一般精液稀释液中卵黄的含量范围为15%～20%为宜。

1.3冷冻保护剂

迄今已证实了几种低温保护剂对精子的作用，例如DMS()、乙二醇和甘油等，但是甘油具备对精子最好的保护效果。Bernstein等首次研究发现9.2%浓度的甘油在21℃情况下具备冷冻保存哺乳动物和家禽精液的能力。Ploge等2。深入研究了甘油的抗冷冻效果。Emmens等在79℃情况下成功的进行了绵羊精液冷冻保存。从日前研究现状来看，由于甘油渗透和毒性作用，其浓度不易过高，添加应用最多剂量甘油浓度为6%。

1.4缓冲物质

精液中的精子一直处于运动和代谢中，造成稀释液中的pH值不断升高，一般稀释液的pH值在6.8～7.2之间。为更有利于精子生存，凶此向稀释液中添加缓冲物质。Tris、EDTA和柠檬酸盐等是冻精稀释液应用较多的缓冲物质，主要作用是缓冲精子在保存过程中由于代谢而使精液的pH值的升高带来不利影响，起到降低pH值的作用。柠檬酸盐是应用最早的缓冲物质。王俊峰研究认为Tris（三羟甲基氨基甲烷）作为冷冻稀释液在牛的精液冷冻中起到很好的缓冲作用。Salamon研究发现Tris在绵羊的稀释液中也具有更好的缓冲性和渗透性，并且毒性作用较低。有研究表明，Tris葡萄糖卵黄稀释液冷冻的绵羊精子解冻后的复苏率更高。在Tris稀释液中添加浓度为7.3%的大豆磷脂，解冻后精子顶体的完整性最好。

2、冷冻和解冻操作过程对冻精液品质的影响

2..1精液稀释和冷冻平衡

实验之前根据不同的冷冻方法采取不同的稀释比例，颗粒精液一般采用1:1的比例，而细管精液冷冻一般为1:3。当稀释倍数增加，产羔率就会下降。两次稀释法能够大大降低甘油等冷冻保护剂对精子的毒害作用。稀释以后冉进行降温与平衡。Polge最先在牛的精液冷冻保存中应用了平衡技术。平衡后一般有更好的冷冻结果，温度控制在4～5℃之间。丁瑜等¨研究结果表明，水浴平衡由37℃降温到5℃时，降温速率为每分钟0.21℃，降温平衡到5℃的方法对绵羊冷冻解冻精子有较好的保护效果。

2..2冷冻和解冻

日前普遍公认的精液冷冻保存的原理是在冷冻精液过程中避开冰晶形成的温度区，使精子内外的水分急速降温在60～-250℃的超低温玻璃化温度区下形成玻璃化冻结，加以长期保存。其中初冻温度对解冻后精子的活率起到关键作用。赖彦等通过液氮熏蒸将初冻温度控制在80℃可以使绵羊情期受胎率提高0.9～1.7个百分点。研究学者认为精液的冷冻要选择合适的速率，不能过快，也不能过慢，过快的冷冻速率造成精子细胞内的大量水分不能够渗出，冰晶化形成，造成精子死亡现象的发生；冷冻速率过慢，导致稀释液渗透压和pH的变换，从而影响精子活率。

解冻过程是精液冷冻的逆过程，同样要避免精子冰晶化的形成。不同的解冻条件对羊冷冻精液品质有着很大的影响。梁术奎等研究结果肉用种公羊细管冷冻的精液在／I5～60℃的水浴条件下，精子复苏率达到74%。周占琴等研究维生素B12用于山羊冻精颗粒解冻，效果十分理想。与干解冻和2.9%柠檬酸钠相比，维生素B12解冻的精液不仅活力旺盛，而且在室温和低温条件下的保存时间延长了2．41～6.35倍。

提高肉羊胚胎生产质量的关键技术

肉羊产业是安定区草食畜牧业的支柱产业之一，在国民经济中占有重要的地位，是解决“三农”问题的重点突破口。胚胎移植技术是肉羊育种应用的一项高新技术，在肉羊品种改良中发挥重要作用。胚胎移植的成功率受多种因素影响，其中胚胎质量是其重要影响因素，而胚胎一旦生产出来，只能通过胚胎发育形态对其进行质量评定，再无法进行内部质量控制。因此在胚胎生产各个环节来进行控制以提高胚胎质量尤为重要。下面具体来了解一下：提高肉羊胚胎生产质量的关键技术。

1、供体肉羊方面

1.1供体肉羊的选择

选择经济价值较高的肉羊，品种优良、生产性能好；遗传性能稳定、谱系清楚；体质健壮、繁殖机能旺盛，无遗传病、生殖道疾病和传染性疾病。年龄在26岁以下为宜；性周期正常，产羔60天以上，经观察至少有两个以上正常发情周期的母羊。

1.2供体母羊的饲养管理

供体母羊手术前后饲养管理的好坏直接影响到胚胎的数量和质量。肉羊在保证日粮营养需要的蛋白质、能量基础上，要加喂足量的维生素A、维生素D和维生素E，在移植前1个月，提高营养水平15%-20%；移植前的5-8天，提高营养水平30%-40%，保证供体有良好的体况，过肥和过瘦的供体母羊都会影响排卵和受精。保持饲养环境稳定、环境卫生清洁、干燥，栅舍温度适宜，避免各种应激反应。

羊术前空腹24h，只给饮水，术后不要立即饲喂，给少许干草，不要让其卧地，防止污染创口，术后需要观察24h，加强饲养管理，尽快恢复体力。整个输精、采胚过程要迅速、准确、轻柔，避免生殖器官暴露体外时间过长，切忌频繁触摸和拉扯生殖器官，以防黏连。

1.3供体肉羊的输精

1.3.1公羊的选择

种公羊应与供体母羊品种一致，且具有明显的本品种特征，身体健康，无遗传或传染性疾病，体型外貌较好，结构匀称，四肢粗壮，睾丸大小适中而匀称，年龄在2-5岁之间。性欲强，精液品质好，精液生产和保存符合标准，新鲜精子活力在o．7-0.8之间，密度在中等以上，精子畸形率不超过20%。

1.3.2适时输精

应用公羊试情法对供体母羊进行发情鉴定，发现有站立不动的并接近公羊或者被公羊爬跨的母羊，即为发情母羊。每只羊输精3-4次，每次间隔12h，或者输精至不接受爬跨为止，以减少无精卵发生率，同时在配种时注射LHRH-A3有助于卵母细胞集中排出，进行受精，可提高胚胎发育的同期率。

1.4采卵

授精后第6天采集供体内的桑椹期到囊胚期胚胎。禁食24h（只给饮水）后，将羊保定到保定架上，用肥皂水清洗手术部位，用剃毛机将手术部位毛剃去，然后对手术部位消毒（用O.l%新吉尔灭清洗手术部位后，5%碘酊擦拭，最后月75%酒精棉球擦拭），肌肉注射速眠新全身麻醉(依据羊的肉体大小注射0.1-o．2mL)，在距离乳房前端2cm处，用消毒刀片纵向切开6-8cm长口，将皮下结缔组织分离，暴露出肌膜，用手术刀将肌膜轻轻切开，露出肌肉层，再用刀柄后端将肌肉层和腹膜钝性剥离开，在骨盆腔和膀胱周围触摸子宫角并将卵巢、子宫引出切口外冲洗子宫收集胚胎。

2、环境控制及器材消毒处理

2..1实验室卫生、消毒处理

实验室内设备、台面要每周清扫1次，工作台、显微镜等常用设备在用前要用70%酒精棉擦拭消毒；地面保持干净、整洁，无灰尘；门窗要密闭，防止灰尘落入，同时安装空气过滤器以净化实验室内的环境空气，实验前对实验室要进行紫外灯照射30min进行消毒。

2..2实验器材、用品消毒

输精、采卵过程所接触的器材、液体等要严格消毒。玻璃器皿、金属制品应用干热灭菌法消毒；培养液、棉制品及工作服等应用高压灭菌法进行消毒；橡胶、塑料制品用E0气体灭菌；包装的热敏医疗材料在实验操作之前用r-射线照射消毒，并且每输完一只羊要对输精器设备等及时清洗消毒后才能重复使用，有条件的最好用一次性器具。

3、操作人员要求

输精、采卵人员要严格遵守操作规程，输精时要做到慢慢插入阴道深部，做到轻轻推注精液，对阴道狭窄的母羊，用开膣器无法充分打开，很难找子宫颈口时，可采用阴道内输精，但输精量需增加1倍，以确保所排卵子尽量都受精。

非实验内操作人员未经允许不得擅自进入实验室，以免带入细菌，同时操作人员在操作过程中杜绝交谈，以免唾液飞溅，污染环境。

4、胚胎处理

收集到的冲洗液须静置，待胚胎下沉后，移去上层液，在显微镜下尽量检出所有胚胎，避免丢失，正确检测胚胎发育情况，迅速做好胚胎体外处理，一般胚胎体外停留时间超过3h，移植受胎率会降低，同时，对胚胎要清洗干净，确保胚胎在处理过程中不被污染。

5、小结

胚胎生产环节在肉羊胚胎移植技术中占有重要作用，是关系胚胎移植成败的关键。胚胎生产环节复杂，因此从生产环节上严格把控胚胎生产质量尤为重要。选择适宜的供体，利用优质的精液，采用正确的输精方式对发情供体进行授精，然后采用手术法对供体肉羊采集胚胎并对胚胎进行体外处理，在此过程中尽量做到无菌化操作，减少胚胎污染，提高胚胎质量。肉羊卵母细胞的排出是性激素影响下的一系列复杂的生理过程，在研究提升胚胎生产质量的同时，提高胚胎生产数量及受体胚胎移植妊娠率，降低胚胎移植肉羊生产成本是下一步研究的重点。

肉羊产业是安定区草食畜牧业的支柱产业之一，在国民经济中占有重要的地位，是解决“三农”问题的重点突破口。安定区养羊业历史悠久，羊产业资源丰富，但随着现代畜牧业的发展，现有的肉羊生产体系已滞后于社会经济发展的需求，主要表现为肉羊品种良种化程度低、良种供种能力低、肉羊生产商品率低，资源优势没有转化为经济优势，社会、经济和生态效益未充分的发挥出来，严重制约了农民增收致富的进程。而导致肉羊生产潜力不能充分发挥的主要限制因素是具有良好遗传基因的肉羊品种数量少、缺口大，难以满足现阶段肉羊良种化生产的需要。

破该瓶颈的途径就是坚持以农民增收、增效为核心，以胚胎移植等生物工程高新技术的转化应用为切入点，加速优良品种扩繁速度，增强制种供种能力，实现肉羊产业良种化技术的新突破。
定西旺盛养殖有限公司抢抓这一有利时机，在市区业务主管部门的协调下，在专家学者的指导帮助下，与甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所合作，开展了肉羊胚胎移植技术的示范推广。该公司开展肉羊胚胎移植技术以引进国外良种肉羊品种萨福克、陶赛特、特克赛尔、杜泊等做供体，以小尾寒羊为受体，应用错时同期发情技术提高母羊同期发情率，应用超数排卵、手术胚胎移植等技术提高A级胚胎回收数量，提升优质种羊数量及品质，建立适应安定区的良种肉羊胚胎移植技术体系。在安定区团结、青岚、香泉、宁远等乡镇建立胚胎移植技术服务中心和人工授精点，通过技术培训和推广，提高肉羊个体生产性能、饲料转化率、出栏率和商品率，增加养殖户的经济收入，扶持规模养殖场、养殖专业户发展。
定西旺盛养殖有限公司位于团结镇唐家堡村，始建于2009年，是一家集肉羊繁育、育肥于一体的省级种畜禽场。2013年公司成立了市级工程技术研究中心，在畜牧养殖的发展上，通过加强肉羊良种繁育生产设施建设，有效改善了繁育生产条件，为开展肉羊胚胎移植技术的示范推广提供了有利平台。目前，该企业已成功完成肉羊胚胎移植手术30例，成功率达100%。计划9月份继续开展60例。开展肉羊胚胎移植技术研究推广，能够提高企业养殖科技含量，加快优良品种扩繁速度，提高种群质量，以小投资换得大效益，降低企业生产成本30%以上。
肉羊胚胎移植技术的大力推广，将会有效调整优化肉羊生产结构，全面提高肉羊生产的效率和质量，促进肉羊生产向质量效益型转变，大幅度提升肉羊生产效益。同时，利用优良品种从事肉羊生产，转变生产方式，有力地加快肉羊产业良种化进程，形成高产优质高效低耗的新型畜群结构，从根本上转变传统的养羊模式，促进肉羊产业的快速发展。

影响肉羊超数排卵效果综合因素分析

超数排卵和胚胎移植技术结合是提高优良肉羊繁殖力的有效方法,可以充分发掘优良母羊的繁殖潜力,获得更多的肉羊后代,加速良种繁育。虽然超数排卵技术在肉羊上的应用已较为广泛,但是在应用的稳定性上还存在许多不足。现就超数排卵肉羊个体原因、超排方法、季节、采胚方法等几方面因素进行探讨、分析,旨在提高肉羊超排稳定性提供借鉴和参考。下面具体来了解一下：影响肉羊超数排卵效果综合因素。

1、供体因素

1.1品种

不同品种肉羊超排效果也不相同，同一品种不同个体对超排激素的反应也不相同。研究者们对不同品种肉羊进行超排，其中白萨福克（7.67枚／只）、杜伯（6.25枚／只）和德克塞尔（6.20枚／只）品种好于美利奴（3.0枚／只）和黑萨福克（3.33枚／只）。唐大伟等用无角陶塞特、特克萨尔和萨福克三个品种肉羊进行超数排卵试验，结果陶塞特羊超排效果优于其他两种肉羊。

1.2胎次

有研究者发现经产3-5胎次供体母羊超排后获得可用胚胎数要高于经产1胎次母羊，也有报道1-3胎次母羊超排效果差异不显著，但是4胎以上的羊可用胚胎数明显下降。赵霞选择育成羊和经产2胎以上的供体肉羊进行超排处理，平均获卵率差异不显著。这说明选择育成羊进行超排效果也较好，由此可见，经产2-3次的胎肉羊超排效果较好，这可能由于母羊第2胎以后生殖系统发育完善并生殖机能趋于稳定，排卵数也稳定，如果在供体不足的情况下，育成羊由于繁殖疾病较少，作为生产胚胎的供体应用效果也较好。

1.3年龄

肉羊年龄对超排效果也有一定的影响。苏和等试验结果表明，3-6岁羊超排显著高于7岁以上的老龄羊；赵霞对育成羊至6周岁的肉羊进行超排处理，平均获卵率差异不显著，只是对育成羊进行初次超排处理时，性激素使用剂量要相对降低，可以防止卵巢上卵泡的过度发育而对生殖机能造成不利影响。

1.4营养状况

肉羊营养状况对其超排效果影响较大，一般体况水平过高或过低对肉羊超排效果都有影响。邓瑞广等的研究结果表明，中上体况供体母羊平均获可用胚（17.67枚／只）显著高于下等体况（12.20枚／只）。

1.5卵巢状态

卵巢发育状态大大影响肉羊超排效果。邓瑞广等对卵巢不同发育状况的供体母羊进行超排效果比较，发现卵巢发育情况良好平均获可用胚为19.25枚／只，发育情况差的供体为7.33枚／只，差异极显著。

1.6体重

肉羊体重对超数排卵效果也有一定的影响。高志英等选择64只健康的德国美利奴、无角道赛特、特克塞尔肉用绵羊，根据体重分组进行超数排卵，试验结果表明体重在41-70kg肉羊胚胎可用率高于体重超过70kg的肉羊，成母羊在激素剂量、纯度等一定的条件下超排，体重稍小的羊卵巢发育排卵的卵泡及未排卵的卵泡显著较多，且在一定的体重范围内超排效果与体重呈正相关。

2、环境因素

2..1季节

季节对肉羊超数排卵效果也存在一定的影响。高志英等H报道，秋、冬季节超排肉羊胚胎可用率高于春季。李福俊研究结果表明，在9-10月份，即秋季对绵羊进行超数排卵效果较好。邓广瑞等等对不同季节时期供体羊超排对比试验表明，秋季和春季母羊超排平均获可用胚分别为16.70枚／只和13.50枚／只，并且秋季超排效果好于春季。赵霞在内蒙古地区分别从8月中旬-12月中旬对肉羊进行超排处理，结果表明8月中旬-11月中旬的冬季对肉羊超排效果较高，且较稳定，11月中旬-12月中旬的冬季超排效果较差。这表明季节对肉羊超排效果影响较大，秋季超排效果优于冬季。

2..2日照时间

冯彦君等在不同季节应用同一激素等剂量超排，结果在日照时间平均11-12h／d的10月-11月间超排的肉羊效果最好。

2..3饲养方式

肉羊舍饲与放牧十补饲饲养方式下进行超排效果相比，前者可用胚胎数显著高于后者。有研究者对补饲和放牧不补饲状态下的肉羊进行超排处理，补饲条件下的供体肉羊平均获得可用胚胎率显著高于放牧不补饲下的供体羊，这表明饲养方式对肉羊超排效果有一定的影响，舍饲肉羊超排效果好于放牧条件的肉羊，补饲的肉羊超排效果好于不补饲养的肉羊。

3、超排因素

3.1超排方案

超排方法对肉羊超排效果影响较大。张璐等应用CIDR+FSH对肉羊进行超数排卵处理，采用FSH剂量递减所获平均可用胚胎数（6.20枚／只）高于采用FSH同等剂量超排效果(4.75枚／只)。

3.2重复超排

重复超排效果依个体和品种不同而不同。许斌等对萨福克羊和特克塞尔肉羊进行重复超数排卵试验，结果表明重复超排效果显著高于第一次超排结果，赵霞等对波尔山羊实施两次超排处理，结果两次超排所获得的平均可用胚胎数差异不显著，陈童等对肉羊进行重复超排试验，结果表明重复超排对胚胎可用率无太大影响，赵霞对肉羊进行重复超排，结果第二次超排获得胚胎数低于第一次，第三次超排获得可用胚胎数明显低于第一次和第二次，这可能是由于重复超排可使肉羊发生输卵管伞或输卵管黏连，因此胚胎回收率有所降低。

3.3激素

进行肉羊供体超排时，所用激素的种类、剂量、产地等不同，超排效果也不相同。目前，肉羊主要的超排所用激素有孕马血清促性腺激素(PMSG)和促卵泡素(FSH)等促进卵泡生殖发育的药物，以及人绒毛膜促性腺激素(hCG)和促黄体素(LH)等促进卵泡成熟与排卵的药物。张璐等应用FSH和PMSG共同对肉羊进行超排，平均可用胚胎数为6.60枚／只，结果效果好于单独使用FSH（6.20枚／只）或者FSH+PG(5.67枚／只)，同时试验用高剂量FSH与适宜剂量的FSH对肉羊进行超排比较，虽然黄体数较高，但是胚胎受精率却较低，可用胚胎数较少。王锋等研究不同剂量FSH对母羊超排效果影响，试验结果表明，FSH剂量对供体超排效果影响较大，一定范围内随着FSH剂量的增加，黄体数和可用胚胎数显著增加，相同来源的激素，在合理剂量内，超排效果随剂量上升而增加，但激素剂量过大时，容易引起卵巢发育过度，卵泡数量过多，所排卵子质量降低，影响胚胎的可用率。

4、采胚方法

输卵管法收集胚胎，胚胎回收率高于子宫角法。张果平等试验结果表明，输卵管平均回收胚胎数（10.14枚／只）显著高于从子宫角平均回收胚胎数（8.22枚／只），但是陈童等试验结果表明，输卵管法回收胚对母羊造成的损伤较大，极易造成黏连，影响超排效果。

5、配种方式

供体肉羊配种方式对其超排后获得可用胚胎数影响较大。房义等试验结果表明，腹腔内窥镜输精的平均可用胚数显著高于自然交配和常规人工授精，自然交配的肉羊供体未受精卵较高。苏和等对超排母羊采用内窥镜输精方法与腹腔镜和人工授精方法结合输精对比，胚胎受精率差异不显著。姚玉昌等对超排绵羊采用自然交配、子宫颈口输精、腹腔内子宫角输精方式进行配种，结果腹腔内子宫角输精方式卵子受精率最高，子宫颈口输精方式最低。

6、小结

超数排卵和胚胎移植技术是肉羊育种和快速繁育的重要手段，在生产实践中得到了一定的推广应用，但还没有完全达到产业化阶段，这是因为超数排卵技术是一个复杂的激素调解过程，影响因素比较多，相信随着人们对这些因素的不断研究和一一解决，超数排卵和胚胎移植技术一定能在羊的育种和扩繁中发挥更大的作用。

地方良种—南阳黄牛

南阳黄牛是全国五大良种黄牛之首，其特征主要体现在：体躯高大，力强持久，肉质细，香味浓，大理石花纹明显，皮质优良。南阳黄牛毛色分黄、红、草白三种，黄色为主，而且役用性能、肉用性能及适应性能俱佳。下面我们具体来了解一下这个：地方良种—南阳黄牛

一、外貌特征：南阳黄牛属大型役肉兼用品种，体格高大，肌肉发达，结构紧凑，皮薄毛细，行动迅速，鼻颈宽，口大方正，肩部宽厚，胸骨突出，肋间紧密，背腰平直，尾巴较细。四肢端正，筋腱明显，蹄质坚实。公牛头部雄壮方正，额微凹，颈短厚稍呈方形，颈侧多有皱襞；肩峰隆起8～9厘米，肩胛斜长；前躯比较发达。睾丸对称。母牛头清秀，较窄长；颈薄呈水平状，长短适中；一般中后躯发育较好，但部分牛存在胸部深度不够，尻部较斜和乳房发育较差的缺点。南阳黄牛的毛色有黄、紅、草白三种，以深浅不等的黄色为最多，占80%；红色、草白色较少。一般牛的面部、腹下和四肢下部毛色较浅，鼻颈多为肉红色，其中部分带有黑点，鼻黏膜多数为浅红色。蹄壳以黄蜡色、琥珀色带血筋者为多。公牛角基较粗，以萝卜头角和扁担角为主；母牛角较细、短，多为细角、扒角、疙瘩角。母牛一般体重400～600公斤，公牛最大体重可达1000公斤以上。
二、役用性能：南阳黄牛公母牛都善走，挽车与耕作迅速，有快牛之称，役用能力强。公牛最大挽力为398.6公斤，占体重的74%；母牛最大挽力为275.1公斤，占体重的65.3%。耕地时，公牛一般挽力为123.8公斤，占体重的25.7%；母牛一般挽力为105.4公斤，占体重的25.9%；阉牛一般挽力为146.7公斤，占体重的24.9%。耕地速度：公牛为每秒0.81米，母牛为每秒0.76米，阉牛为每秒0.84米。一般每日可耕地2～3亩，载重1000～1500公斤，日行30～40公里。
三、肉用性能：中等膘情公牛屠宰率为52.2%，净肉率为43.6%，骨肉比为1∶5，胴体产肉率为83.5%，眼肌面积为60.9平方厘米。血占体重的3.1%，心占0.63%，肺占0.62%，脾占0.16%，胃占3.62%，肠占2.18%。

养成培育
实验改良
据南阳黄牛研究所试验，育成公牛肥育7~8个月至1.5岁，以青饲料为主，精料日喂3~4公斤，试验结束时平均体重为441.7公斤；平均日增重813克，平均每增重1公斤耗料7.6个饲料单位，消耗可消化蛋白质740.6克，平均屠宰率为55.6%，净肉率46.6%，眼肌面积为92.6平方厘米。

1980~1981年，中日双方联合在南阳地区黄牛研究所试验，对75头壮龄阉牛进行强度育肥试验，肥育9个月，平均体重达577.7公斤，平均日增重0.65公斤，每增重1公斤消耗14.64个饲料单位，消耗可消化蛋白质1301克，屠宰率为64.5%，净肉率为56.8%，肉中粗脂肪含量高达54.64%。
南阳黄牛在我国的很多省区被大量用于改良当地黄牛。南阳地区多年来向全国提供种牛17000多头。在纯种选育和本身的改良上有向早熟肉用方向和兼用方向发展的趋势。如与利木赞牛、夏洛莱牛、皮尔蒙特、契安尼娜、西门塔尔牛、鲁西黄牛等牛杂交，可提高产肉、产奶性能和经济效益。
南阳盆地特定的土壤和气候条件，是南阳黄牛这一特有品种形成的基本因素。南阳地处亚热带和暖温带的过渡带，四季分明，光照充足，雨量适中，无霜期长。尤其是占南阳盆地面积70%以上的唐、白河流域，岗峦、河谷相间，平原面积广阔，土地肥沃，人口稠密。历史上，大面积的山岗荒地和河谷湿地为南阳黄牛的生长提供了充足的牧草，肥沃平原的大面积耕作既需役使大批耕牛，又为饲养南阳黄牛提供了秸秆等饲料。在这些特殊的自然条件作用下，经过千百年的培育，南阳黄牛逐渐成为体躯大、耐粗饲、品质优、数量多、役肉兼用的优秀地方品牌。
养牛历史
南阳农民历来有养牛习惯。远在春秋时代，南阳黄牛已进入了舍饲、圈养阶段。生于斯长于斯的秦国名相百里奚就善于养牛，在他大半生的落魄生涯中，于南阳城西麒麟岗养牛成为他谋生的主要手段。明清时代，南阳黄牛已遍布于唐、白河流域。悠久的养牛历史，孕育了南阳盆地千家万户养牛的民风；南阳农民普遍具有养牛习惯和技能。
建国初期，国家有关部门在南阳市建立了全国第一个黄牛繁育专门机构，开展对南阳黄牛的系统选育。上世纪七十年代，南阳率先在国内推广普及牛的冷配技术，

实现了黄牛育种史上的一次历史性跨越。上世纪八十年代，国家有关部门制订并颁布实施南阳牛国家标准，同时把品系繁育技术应用于南阳黄牛育种工作中。上世纪九十年代，科技人员首次把胚胎移植技术引入南阳黄牛育种工作中，又明确提出了把南阳黄牛培育成为我国一个专门肉牛品种的目标，以填补我国肉牛品种的空白。该项目相继被列入国家“948”项目和省、市重大科技攻关项目。1998年，南阳黄牛被国家农业部首批列入国家畜禽品种保护名录，2002年又通过国家质量技术监督总局原产地标记域名注册。
悠久的黄牛养殖历史，优越的自然条件，几十年来的科技创新和标准化建设，有力促进了南阳黄牛的育种，南阳黄牛品质得到大幅度提高。南阳黄牛，数量最多，品质优，分布广，已成为国内外专家学者认同、在国内外市场叫得响的一个优秀地方品牌，是南阳人民宝贵的资源财富。
据初步统计，止2003年，全市黄牛饲养量达442.2万头，其中存栏300.5万头，占全国2.3%、全省的22.6%；年产牛肉18.2万吨。
黄牛及其产品辐射上海、北京等全国十几个大中城市，并远销俄罗斯、韩国、日本、中东、香港等国家和地区。南阳黄牛品牌已经叫响，南阳黄牛产业正逐步形成，并正在成为南阳市发展农村经济的特色产业。

感泰对低致病性禽流感的防治效果研究

禽流感（AvianInfluenza，AI）是禽类流行性感冒的简称，目前临床根据所感染的毒株以及其致病性将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和非致病性禽流感。禽流感血清学调查发现，H9亚型的阳性鸡群占禽流感阳性总数的93.89%，证实了禽流感尤其是中等毒力以下的H9亚型禽流感病毒株在我国各地已呈较大范围的扩散，已成为我国养鸡业健康养殖的潜在威胁，事实上，已经给近年来的养鸡业造成了巨大的经济损失。控制低致病性禽流感的关键性措施仍然是通过免疫接种提高机体特异性抗病能力，目前H9N2亚型禽流感油乳剂灭活苗已在全国几乎所有鸡场大面积进行强化免疫。但由于禽流感病毒血清型众多、各型病毒的毒力差异很大、病毒极易发生变异以及混合感染等因素，使得疫苗的预防效果大打折扣。因此，成功有效防控低致病性禽流感，不仅需要进一步研制高效、安全、可靠的禽流感多价灭活苗，同时还急需研究开发疗效确实的预防和治疗药物，用以弥补免疫失败后的防控措施。感泰是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所科研人员研制的中西结合防治药物，据不完全统计，近五年来已将其试用于约300万只疑似H9N2发病产蛋鸡和商品肉鸡，取得了较好的治疗效果，现予报道。
1一般资料
根据对甘肃兰州、定西、白银、天水、临夏等地100余家养鸡场的不完全统计，自2009年以来，低致病性禽流感多在产蛋高峰期或产蛋临近高峰期发生。临床可见鸡群突然有轻重不同的呼吸道啰音或打喷嚏等临床表现，感染鸡群发生明显的采食量降低和饮水量增加，随之产蛋大幅度降低，蛋壳薄且颜色变白，粪便稀薄，颜色黄绿或白水样；几乎每天都有大约0.1%的死亡，偶尔会猛增数倍。详细观察鸡群，个别鸡不愿活动、缩颈喜卧、闭眼昏睡，触诊肌肤体温较高，腿胫部尤为明显；严重病鸡冠髯发绀，冠尖干枯；脚胫鳞片色暗紫、鳞片下点状或片状鲜红出血。
2诊断
2.1临床诊断
脚胫鳞片下出血为本病特征性病变，口腔有大量痰液，个别死鸡气管黏膜增厚并呈弥漫性出血；头颈皮下严重淤血并有零星出血斑；腹部及其他器官脂肪有点状或大片状出血；个别鸡群肝脏破裂或肝脏不同部位散在有豆大血袋；大部分死亡鸡具有卵黄性腹膜炎或腹腔有弥漫性乳状物，卵巢出血、卵黄膜出血似紫葡萄样，几乎所有的卵黄皱缩变形，多数较小的卵黄呈血袋状；输卵管严重水肿，浆膜面和黏膜面均有大面积出血，输卵管内常可见到凝乳块样或较稀薄的黏稠物；几乎所有的死亡鸡肝脏淤血肿大，有些死亡鸡肝脏破裂；腺胃黏膜或腺胃乳头有时出血，小肠黏膜弥漫性出血，有时小肠内容物中混有血液；胰脏肿大，并有白色粒状坏死点和出血斑点。
2.2实验室诊断
全部病例分别采用武汉飞远科技有限公司和石家庄市神九畜禽疾病防治及药物究所研制生产的禽流感胶体金快速诊断试纸条，诊断方法按规定要求规范操作，抽样诊断结果均为阳性的鸡群纳入该药防治范围。
3鉴别诊断
3.1新城疫
新城疫不出现冠、髯的紫黑色出血斑，腿部鳞片也不会发生出血，肝脏以及输卵管病理变化少见，低致病性禽流感的胰脏坏死出血及早期卵黄性腹膜炎或纤维素性腹膜炎在新城疫病鸡也十分罕见。新城疫病鸡仅在疾病的后期，少数病鸡会发生纤维素性腹膜炎。患新城疫的病鸡群，用新城疫Ⅰ系疫苗紧急接种，效果良好。低致病性禽流感发病时使用新城疫Ⅰ系疫苗免疫，则死亡急剧增加。
3.2支原体感染
鸡的支原体病多呈慢性经过，单纯感染时很少死亡，对采食和饮水一般几无影响，同时其特征性的临床表现鼻腔和眶下窦有干酪样渗出物，引起眶下窦肿胀、眼部突出等，这在低致病性禽流感病鸡中是不会出现的；慢性呼吸道的病变主要在鼻腔、气管、支气管和气囊，几乎没有或少见卵巢和输卵管以及消化道的水肿、出血等病变。慢性呼吸道病用泰乐菌素、红霉素以及其他抗生素治疗都有较为满意的疗效，而低致病性禽流感用以上药物治疗收效甚微。
3.3减蛋综合征
减蛋综合征一般没有低致病性禽流感头部发紫、器官出血、卵巢和输卵管严重水肿和出血病变，尤其不见腿胫鳞片的出血性变化。
4对症治疗
4.1药物及功能主治
感泰为中西药结合制剂，所选用的西药具有抗菌消炎、解热镇痛作用，能缓解高热神昏、口渴引饮的临床症状，同时还能控制其他细菌病的继发或混合感染。所含中药具有清热救阴、凉血解毒之功，和西药结合应用，相互协同增效，能显著缓解低致病性禽流感病鸡一系列严重症状和病理变化，迅速改善和提高机体抗病能力。
4.2用法用量
感泰，一天量250mg/kg体重，分早、晚两次加入饮用水或饲料中，连续用药5～7d。
5典型病例
兰州市西固区某鸡场两栋鸡舍共饲养产蛋鸡4300只，第一栋为2400只，第二栋饲养1900只，发病时产蛋率分别为94%（4042/4300）和83%（1992/2400）。先后于2010年10月和11月发病，两群鸡均有轻微的呼吸道症状，鸡群采食下降，饮水急剧增加，部分鸡闭眼昏睡，不愿活动。第一栋发病5天产蛋从94%下降至68%（2924/4300），第二栋发病后的5天中，产蛋率从84%下降至76%（1824/2400）。日死亡分别为23只和9只，死亡率分别为0.54%（23/4300）和0.38%（9/2400），总死亡率分别为2.7%和1.9%。出现典型临床症状病鸡数63只和12只，临床发病率分别为1.45%（63/4300）和0.5%（12/2400）。死亡鸡冠、髯、脸色紫黑，脚胫鳞片颜色青紫，鳞片下有新鲜出血斑点。剖检见皮下大片出血，鼻窦淤血，有黄白色黏稠分泌物，气管弥漫性出血，有大量黄色或含血样黏稠痰液，肺暗红色甚或紫黑色。腹部脂肪点状出血，个别腺胃乳头基部有暗红色出血斑，十二指肠弥漫性出血。胰脏变性，边缘有不规则出血斑。肝脏淤血肿大，表面有黄色条纹，个别肝包膜下有大小不等的血袋。卵巢卵黄黑紫色或鲜红色出血，输卵管严重水肿，内有大量胶冻状脓性分泌物，子宫部有明显出血。气管、泄殖腔棉拭子病料，经用武汉飞远科技有限公司禽流感抗原检测胶体金快速诊断试纸条（批号081222）检验H9N2均呈阳性。临床表现和病理剖检以及快速诊断结合，确诊为低致病性禽流感。随即用复方感泰分早晚2次加入饮水，连续用药7d。在用药的第3天死亡和病鸡数减少到3只和1只，产蛋下降停止，并略有回升。用药7天时，总计死亡分别为6只和4只，总死亡率分别为0.14%（6/4300）和0.17%（4/2400），分别比用药前降低2.57%和1.73%。新发现的病鸡分别为4只和2只，临床发病率分别为0.09%（4/4300）和0.08%（2/2400）。饮食基本恢复正常，产蛋开始明显上升，产蛋率分别为84.0%（3612/4300）和79.2%（1900/2400），分别较用药前提高16.0%和3.2%。
6讨论和体会
自2009年4月以来，用感泰治疗低致病性禽流感病鸡共计近300万只，涉及甘肃省的兰州、天水、定西、白银、临夏等州市的100余家养鸡场，所有发病鸡群都进行过一次或两次禽流感H9N2油乳剂灭活苗的免疫接种。发病后，大多曾用环丙沙星、庆大霉素、大败毒以及双黄连等进行过反复治疗，但收效甚微甚至几无效果，改用感泰进行治疗，能迅速解除患鸡群高热神昏大渴引饮的临床表现，患鸡群采食量恢复、产蛋下降停止或减缓。随着进一步的治疗，在连续用药7d后，能有效控制死亡，鸡群生产性能开始恢复正常。
低致病性禽流感主要临床特征为高热神昏、大渴引饮，皮下、肌肉、内脏多器官严重出血。中兽医认为，本病病机乃气分热邪未除、血分之邪已盛，热为阳邪，易伤津液致使气营两燔，故病鸡呈现大热大渴、饮水自救状；热邪太盛，迫血妄行，皮肤肌肉内脏器官严重出血自在情理之中；热邪侵体，化火生风，风火相煽，燎原之势内外鼓荡，神明失主，所以闭目昏睡。感泰为中西兽药结合药物，无论饮水或拌料使用，均能充分发挥中西兽药各自的药效优势，在临床治疗中真正起到中西合璧、相互协同、效果相加作用，从而成功有效地控制低致病性禽流感的发生发展，促进鸡群迅速恢复健康。
参考文献
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庞浩龙，李站立，贡联兵.中西药抗流感病毒研究概况.中华临床医药，2004，5（01）：84-86.
李艳华，王秀荣，田国彬，等.复方中药防治禽流感试验.中国兽医杂志，2005，41（06）：34-35.
基金项目：
科技部科研院所技术开发研究专项（项目编号2013EG134236）；科技部科技基础性工作专项课题（项目编号2013FY110600-8）；甘肃省科技支撑计划（项目编号1104NKCA094）科技部农业科技成果转化资金项目（项目编号2012GB23260560）