随着国内羊产业养殖逐渐生产化需求,人工授精技术对提高动物、畜产品质和扩大数量起到积极重要作用,精液冷冻人工授精技术迫切需要应用于生产推广中。公羊冷冻精液的品质显得至关重要,与其相关的很多因素都能对其质量造成影响,其质量好坏对受胎率起决定性作用,所以要进一步深入研究公羊的精液冷冻技术。为此,本文简要介绍公羊精液稀释液中的营养成分、稀释方法、冷冻温度等因素对精液品质影响的研究概况,以对公羊精液冷冻保存技术提供理论参考。下面具体来看看：公羊冷冻精液技术的研究详情。
1、稀释液主要成分的影响
1.1糖类
糖在稀释液中具有多种作用可以增加稀释液的渗透压并且作为低温保护剂起作用，它的主要作用在于能够在亲水组织中替代水分子，而这一特性就可以对细胞在经历快速的温度变化过程中起到保护细胞膜的作用。另外，糖还可以通过增加稀释液的黏性来改变稀释液的有效性。这样能够防止冰晶的形成而且易于形成玻璃体化。
1.2卵黄
卵黄在稀释液中具备重要作用，具有防止精子冷休克，维持精子活力、保护精子顶体和线粒体膜等功能。Jone等研究证实一般精液稀释液中卵黄的含量范围为15%～20%为宜。
1.3冷冻保护剂
迄今已证实了几种低温保护剂对精子的作用，例如DMS()、乙二醇和甘油等，但是甘油具备对精子最好的保护效果。Bernstein等首次研究发现9.2%浓度的甘油在21℃情况下具备冷冻保存哺乳动物和家禽精液的能力。Ploge等2。深入研究了甘油的抗冷冻效果。Emmens等在79℃情况下成功的进行了绵羊精液冷冻保存。从日前研究现状来看，由于甘油渗透和毒性作用，其浓度不易过高，添加应用最多剂量甘油浓度为6%。
1.4缓冲物质
精液中的精子一直处于运动和代谢中，造成稀释液中的pH值不断升高，一般稀释液的pH值在6.8～7.2之间。为更有利于精子生存，凶此向稀释液中添加缓冲物质。Tris、EDTA和柠檬酸盐等是冻精稀释液应用较多的缓冲物质，主要作用是缓冲精子在保存过程中由于代谢而使精液的pH值的升高带来不利影响，起到降低pH值的作用。柠檬酸盐是应用最早的缓冲物质。王俊峰研究认为Tris（三羟甲基氨基甲烷）作为冷冻稀释液在牛的精液冷冻中起到很好的缓冲作用。Salamon研究发现Tris在绵羊的稀释液中也具有更好的缓冲性和渗透性，并且毒性作用较低。有研究表明，Tris葡萄糖卵黄稀释液冷冻的绵羊精子解冻后的复苏率更高。在Tris稀释液中添加浓度为7.3%的大豆磷脂，解冻后精子顶体的完整性最好。
2、冷冻和解冻操作过程对冻精液品质的影响
2..1精液稀释和冷冻平衡
实验之前根据不同的冷冻方法采取不同的稀释比例，颗粒精液一般采用1:1的比例，而细管精液冷冻一般为1:3。当稀释倍数增加，产羔率就会下降。两次稀释法能够大大降低甘油等冷冻保护剂对精子的毒害作用。稀释以后冉进行降温与平衡。Polge最先在牛的精液冷冻保存中应用了平衡技术。平衡后一般有更好的冷冻结果，温度控制在4～5℃之间。丁瑜等¨研究结果表明，水浴平衡由37℃降温到5℃时，降温速率为每分钟0.21℃，降温平衡到5℃的方法对绵羊冷冻解冻精子有较好的保护效果。
2..2冷冻和解冻
日前普遍公认的精液冷冻保存的原理是在冷冻精液过程中避开冰晶形成的温度区，使精子内外的水分急速降温在60～-250℃的超低温玻璃化温度区下形成玻璃化冻结，加以长期保存。其中初冻温度对解冻后精子的活率起到关键作用。赖彦等通过液氮熏蒸将初冻温度控制在80℃可以使绵羊情期受胎率提高0.9～1.7个百分点。研究学者认为精液的冷冻要选择合适的速率，不能过快，也不能过慢，过快的冷冻速率造成精子细胞内的大量水分不能够渗出，冰晶化形成，造成精子死亡现象的发生；冷冻速率过慢，导致稀释液渗透压和pH的变换，从而影响精子活率。
解冻过程是精液冷冻的逆过程，同样要避免精子冰晶化的形成。不同的解冻条件对羊冷冻精液品质有着很大的影响。梁术奎等研究结果肉用种公羊细管冷冻的精液在／I5～60℃的水浴条件下，精子复苏率达到74%。周占琴等研究维生素B12用于山羊冻精颗粒解冻，效果十分理想。与干解冻和2.9%柠檬酸钠相比，维生素B12解冻的精液不仅活力旺盛，而且在室温和低温条件下的保存时间延长了2．41～6.35倍。
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良种肉羊冷冻胚胎移植效果研究
引进良种肉羊冷冻胚胎进行移植生产良种肉羊，可以节省引进活体良种肉羊的费用，减少引种过程带人疾病的风险，加速国内肉羊的优质化进程。目前国外应用冷冻胚胎移植技术进行肉羊良种扩繁及品种改良已经和人工授精技术一样达到了普遍推广应用阶段。下面我们就一起来具体了解一下这项：良种肉羊冷冻胚胎移植效果研究。
1、材料与方法
1.1胚胎
胚胎来源于南非肉用美利奴、黑头杜泊和白头杜？白冷冻优质肉羊胚胎。胚胎均采用1.5mol／L甘油作为抗冻保护剂，解冻后三步法脱出冷冻剂后进行胚胎移植。
1.2受体羊
受体为黑龙江省畜牧研究所试验羊场和甘南县恒泰牧业有限公司饲养的小尾寒羊。选择标准为发情周期正常的2～3岁，空怀，无生殖道疾病，膘情良好的经产母羊。受体用CIDR+PG方法进行同情化处理。在发情后第6.5～7.5天，采用腹腔镜移植技术将胚胎移植到有黄体侧子宫角。
1.3胚胎解冻
从液氮中取出冷冻胚胎细管，在空气中停留10s，然后投入30℃水浴10s，将胚胎从细管中推出，用三步法脱除冷冻保护剂：6%甘油+0.33mol／L蔗糖5min;；3%甘油+0.33mol/L蔗糖5min;Holding液5min。
1.4移植过程
受体羊选择发情第7±0.5天（发情日为O天）的经产小尾寒羊母羊，在腹腔镜进行子宫移植，冻胚经脱出防冻剂甘油后，移植到黄体侧子宫角，每只受体母羊移植1枚胚胎。
2.、移植结果
3、讨论
从表1中可以看出，通过移植冷冻胚胎，获得良种并创造羊冷冻胚胎移植产羔率新纪录。移植受胎率很高，均超过了70%，达到国际先进水平，创造了羊冷冻胚胎移植的新纪录。移植技术、经验值得推广和借鉴。
在胚胎移植期间，共解冻胚胎86枚，移植84枚，有2个装有胚胎的0.25mL塑料细管，在解冻过程中细管棉塞端崩出，导致细管中的大半数液体及胚胎丢失，造成了浪费。采用的解决办法：在解冻胚胎过程中，胚胎从液氮罐中取出时，尽量快速的将细管轻轻甩一下‘2]，将细管棉塞端的液氮甩出去后，再投入30～32℃的水浴中解冻，或者在解冻时，采用镊子夹紧棉塞端就可以避免冷冻胚胎解冻时细管的爆裂而造成的经济损失。
分批解冻进口A、B级胚胎，在移植前要重新进行胚胎形态学质量等级鉴定，合格的胚胎才进行胚胎移植。经鉴定该批次进口的冷冻胚胎可用率达到100%。证明该批次进口的冷冻胚胎质量是优质而可信赖的。
将A级胚胎移植到比供体早发情的受体中时（7.5天），胚胎移植妊娠率没有差异；质量稍差的B级胚胎移植到比供体晚发情的受体时（6.5天），胚胎移植妊娠率没有差异。由于质量稍差的B级胚胎发育迟缓，移植到比供体晚发情的受体时，受体可以为胚胎提供了适宜该发育阶段胚胎的子宫环境。在进行胚胎移植时，考虑供、受体母羊的同期性和胚胎的质量两者的兼顾是很重要的。
影响移植受胎率的因素是多方面的，应仔细操作。但笔者认为移植技术人员的经验、技术水平、受体母羊的选择、受体母羊的饲养管理水平等，是影响胚胎移植受胎率的主要因素。
胚胎移植出生后的羔羊，个别羔羊体质较弱，需要重点看护，确保成活。移植的这些良种肉羊对加速我国肉羊良种化水平，提高饲养肉羊的经济效益具有重要意义。
公猪采精量和精液品质的变化规律研究报告
猪的汗腺退化，导致其不耐热，加之成年公猪皮肤较厚，散热能力较差，尤其在夏季，我国南方地区长时间的高温天气，对种公猪繁殖性能影响很大，热应激更加严重，具体表现为性欲减退、采精量减少、精子活力下降，死亡精子和异常精子数增加，致使本交或人工授精的母猪受胎率比其他季节有所下降。为了进一步查明我国南方地区大白、长白和杜洛克公猪采精量和精液品质不同月份的变化规律，给今后规模化养猪场和种公猪站确定种公猪的饲养头数以及制定精液生产计划提供可靠依据，特对广西某猪场种公猪站2011～2012年连续两年的采精记录进行统计分析，现将结果报告如下：
一、材料和方法
1.资料选择与整理
选取广西某猪场种公猪站2011～2012年的采精记录（包括死精和无精等），分品种分月份计算平均采精量、精子密度、精子活力和畸形率。公猪均为美系，其中大白80～122头，长白88～109头，杜洛克113～161头。
2.猪舍条件
公猪舍分成两栋，每栋设单体大栏58个，定位栏92个。猪舍为全封闭式，大跨度钢结构屋架，采用液泡粪、机械通风、湿帘降温和高效空气过滤系统，高温天气舍内温度保持在26～28℃。
3.饲养管理
2名畜牧兽医技术人员和2名饲养员负责300头公猪的饲喂、采精、刷拭、栏舍卫生和疫苗注射等工作。①饲喂。一般每天喂料3.5千克/头，日喂2次，饲料按种公猪营养标准配制，在此基础上每头再加2个熟鸭蛋，早、晚各1个。②管理。公猪以定位栏饲养为主，单体大栏饲养为辅，不进行室内、户外运动。每天采精后清理粪便和打扫舍内卫生，每3天刷拭猪体1次。
4.采精
成年公猪每6天采精1次，间隔时间为5天；青年公猪8月龄体重达120千克时每周采精1次，间隔时间为6天。对采集的精液即刻进行品质鉴定，包括称重、测密度、检查精子活力和畸形率，做好记录并输入DPS数据处理软件存档。
5.精液检测方法
①密度检测。采用德国进口的精液密度仪，测量方法：将精液盛装在1000毫升烧杯中，用玻璃棒轻轻搅拌，从中间部位取精液1滴，滴入测试片小孔中，把测试片推入精液密度仪内，1分钟左右即可显示出精子的密度。②活力检测。用200倍的双目显微镜接入电脑显示屏，取1滴精液滴在载玻片上，盖上盖玻片。操作要尽可能快些，否则精子会很快死亡，影响活力的判断。③畸形率检测。取原精液少量，用3%氯化钠溶液10倍稀释，进行伊红或姬姆萨染色。④注意事项。一是取样要有代表性；二是检测精子活力用的载玻片和盖玻片应事先放在37℃恒温板上预热，由于温度对精子活力影响较大，温度越高精子运动速度越快，温度越低精子运动速度越慢，因此，精液也应在恒温板上预热30～60秒后再观察；三是观察检测精子活力时，（）应用盖玻片覆盖载玻片，否则，易污染显微镜的镜头，进而导致每次取样的量不同影响精子活力的评定。
二、研究结果
1.种公站地理位置和气温情况
该种公猪站位于北纬22.47、东经108.59，属南亚热带季风气候，太阳辐射强，日照充足，气候温暖，雨量充沛，夏长冬短，无霜期长，少见冰雪。根据气候学上候温划分四季的标准（候温小于10℃为冬季，大于22℃为夏季，10～22℃为春、秋季），此地无冬季，4月下旬至10月中旬为夏季，10月下旬至次年4月中旬为秋、春季，但大多数年份都有短暂的冬季。
2.三品种公猪各月份采精量
图2资料表明：①不同品种公猪相同月份的采精量。1～6月长白公猪采精量均高于大白公猪，其中1月、5月差异显著（P0.05），2月、3月差异极显著（P0.01），4月、6月差异不显著（P0.05）；7月、8月、11月大白公猪采精量高于长白公猪，其中只有8月差异极显著（P0.01），7月、11月差异不显著（P0.05）；9月、10月和12月长白公猪采精量高于大白公猪，其中只有9月差异显著（P0.05），10月、12月差异不显著（P0.05）；杜洛克公猪全年各月采精量均低于大白和长白公猪，其中除1月与大白公猪之间差异显著（P0.05），与长白公猪之间差异极显著（P0.01）以外，2～12月与大白公猪和长白公猪之间差异均极显著（P0.01）。②同一品种不同月份的采精量。三品种均以12月为最高，5月或6月最低。大白公猪除2～6月相邻月之间、7～9月相邻月之间差异极显著（P0.01），9月和10月之间差异显著（P0.05）以外，其余相邻月之间差异不显著（P0.05）。长白公猪除2月与3月、7月与8月、11月与12月之间差异极显著（P0.01），5月与6月、9月与10月之间差异显著（P0.05）以外，其余相邻月之间差异不显著（P0.05）。杜洛克公猪1～3月、6月与7月、9月与10月、11月与12月相邻月之间差异极显著（P0.01），3～5月、8月和9月相邻月之间差异显著（P0.05）。
3.精子密度
图3资料表明：①不同品种相同月份公猪的精子密度。大白公猪最低。与长白公猪和杜洛克公猪之间差异均极显著（P0.01）；长白公猪除5月、6月、8月略高于杜洛克公猪以外，其余各月份均低于杜洛克公猪，其中除4、7两个月杜洛克公猪高于长白公猪，差异极显著（P0.01）外，其余月份两者差异均不显著（P0.05）。②同一品种相邻月份公猪的精子密度。大白公猪除2月与3月、6月与7月、8月与9月、11月与12月之间差异极显著（P0.01），9月和10月之间差异显著（P0.05）以外，其他月份之间差异均不显著（P0.05）。长白公猪除4月和5月、6月和7月、9～11月相邻月之间差异均不显著（P0.05）以外，其他相邻月之间差异均极显著（P0.01）。杜洛克公猪除9～11月相邻月之间差异均不显著（P0.05）以外，其他月份之间差异均极显著（P0.01）。
4.精子活力
图4资料表明：1、2月长白公猪精子活力最高，大白公猪次之，杜洛克公猪最低，但三品种之间差异均不显著（P0.05）。3月长白公猪精子活力最高，与杜洛克公猪和大白公猪之间差异均显著（P0.05）。4月份长白公猪精子活力最高，与大白公猪和杜洛克公猪之间差异均极显著（P0.01）；大白公猪和杜洛克公猪之间差异不显著（P0.05）。5月、6月和9～12月均以长白公猪精子活力最高，大白公猪次之，杜洛克公猪最低，长白公猪与大白公猪之间差异不显著（P0.05），而长白公猪和大白公猪均与杜洛克公猪之间差异极显著（P0.01）。7月、8月仍以长白公猪精子活力最高，大白公猪次之，杜洛克公猪最低，三品种之间差异均极显著（P0.01）。
5.精子畸形率
图5资料表明：①不同品种公猪相同月份的精子畸形率。1～12月大白公猪精子畸形率均最高。1月，杜洛克公猪次之，长白公猪最低，其中只有长白公猪与大白公猪之间差异显著（P0.05），大白公猪与杜洛克公猪之间差异不显著（P0.05）；2月，杜洛克公猪次之，长白公猪最低，其中长白公猪与大白公猪和杜洛克公猪差异均极显著（P0.01），大白公猪与杜洛克公猪差异显著（P0.05）；3月、4月、6月、12月，杜洛克公猪次之，长白公猪最低，其中大白公猪与长白公猪和杜洛克公猪差异均极显著（P0.01），长白公猪和大白公猪均与杜洛克公猪差异不显著（P0.05）；5月，杜洛克公猪次之，长白公猪最低，长白公猪与大白公猪和杜洛克公猪之间差异均极显著（P0.01），大白公猪和杜洛克公猪之间差异不显著（P0.05）；7月，长白公猪次之，杜洛克公猪最低，大白公猪与长白公猪、杜洛克公猪之间差异均极显著（P0.01），长白公猪与杜洛克公猪差异显著（P0.05）；8月，杜洛克公猪次之，长白公猪最低，大白公猪与长白公猪、杜洛克公猪之间差异均极显著（P0.01），长白公猪与杜洛克公猪差异显著（P0.05）；9月、10月，杜洛克公猪次之，长白公猪最低，三品种之间差异均极显著（P0.01）；11月，长白公猪次之，杜洛克公猪最低，三品种之间差异均不显著（P0.05）。②同一品种公猪相邻月份精子畸形率。大白公猪精子畸形率在1～3月之间差异均不显著（P0.05），3月和4月之间差异极显著（P0.01），4月和5月之间差异显著（P0.05），5月、6月、7月完全相同，7～10月之间差异均不显著（P0.05），10～12月之间差异均极显著（P0.01）。长白公猪精子畸形率在1月和2月之间差异极显著（P0.01），2月和3月之间差异不显著（P0.05），3月和4月之间差异显著（P0.05），4～11月相邻月份之间差异均不显著（P0.05），11月和12月之间差异极显著（P0.01）。杜洛克公猪精子畸形率在1月和2月相同，2～9月相邻月之间差异均极显著（P0.01），9月和10月之间差异显著（P0.05），10月和11月之间差异不显著（P0.05），11月和12月之间差异极显著（P0.01）。
三、讨论
1.大白公猪和长白公猪采精量最低均为5月，杜洛克则是6月，都非当地气温最高的7、8、9三个月，这可能是由于4月中旬开始气温就快速上升，5月就常有33～34℃的高温天气出现，尽管该站采取了防暑降温措施，但舍内温度只能控制在26～28℃，仍然超过公猪最适生存温度（15～18℃），公猪一时难以适应。
2.有报道认为，气温是影响公猪精液品质的重要因素之一，随气温升高公猪精液品质下降，气温下降时精液品质恢复。本研究中公猪精子活力和畸形率各月份的变化规律与之完全相符，而精子密度则与之有所不同，原因目前尚未查清。
3.在研究的三品种公猪中，长白公猪的精液品质最好，这与广西大学动科院蒋如明的研究结果一致。杜洛克公猪除精子活力稍低于大白公猪外，精子密度和精子畸形率指标均优于大白公猪，与蒋如明的研究结果有所不同，这表明最晚引进我国的杜洛克猪经过风土驯化，对我国南方地区的高温环境已经开始适应。
（作者联系地址：石勇祥农秀艳广西横县良圻农场永新畜牧公司邮编：530317；吴建新刘兴华勇仲根广西柳城县天福种猪场邮编：545200）
黄鳝的冷冻加工技术
黄鳝除了可以活鳝鱼剖杀，还加工成方便实惠的半制品，如冻筒鳝、冻段鳝、冻鳝丝、冻鳝片等冷冻小包装。下面就于冻鳝片为例，加工过程可以分为选材料、清理污物、冲洗附着物、剖杀、去废、沥血、称重、装盘、结冻、包装等步骤。
1.选料。挑选条重在25g以上体色为灰黄色的活鳝，剔除灰褐色的鳝鱼。
2.清污。将挑好的鳝鱼，集中于水桶或水泥池内，让其自由游动，并勤换清水，以清除表面污物和鳃内泥沙，时间在一天以上。
3.冲洗。将清污后的活鳝鱼，置于干净的萝筐内，用清水进行冲洗，洗掉鳝鱼身上的附着物。同时，将加工鳝鱼片的台面、剖凳、刀具等洗刷干净，并用0.25%的漂白粉溶液作消毒处理。
4.剖杀。先将活鳝鱼摔昏，然后左手压住鳝鱼头，右手将刀从鳝鱼颈部斜切至三角形脊骨的一侧，并沿着这一侧，将刀从头拉划至鱼尾；这样，三侧共拉划3刀，将鳝鱼拉划成3片。
5.去废。清除鳝片中内脏等废物，并将头、尾和脊骨一起丢弃。
6.沥血。将剖好的鳝片放入干净的容器内，()让其自然沥去大部分血水。沥血的时间一般为15-30分钟。
7.称重。将沥去血水的鳝片，过磅秤重，每份按规定的重量分开。一般每份重量为453克。
8.装盘。将鳝片按平铺在冻盘内。冻盘的规格，通常为1809030毫米。平铺时，冻盘底部的鳝片背朝下，上部的鳝片背朝上，并摆放整齐。
9.冻结。将装好鳝片的冻盘及时送进温度在-25℃以下的冻结间，使鳝片中心温度在24小时内降至-15℃以下。采用平板冻结机或速冻柜冻结，可以大大加快冷冻速度，使鳝片中心的温度在4-12小时内达到-15℃以下，从而有效提高产品质量。鳝片经冻结后，即为冻鳝片产品。
10.包装。将冻结的鳝片，从冻结间或速冻柜中取出，带冰脱盘，检验合格后，装入塑料包装袋，用封口机封口，再按额定数量装入纸箱中，贴上商标，即可销售。
