鸡新城疫（鸡瘟）是鸡的一种烈性传染病，是由鸡新城疫病毒引起的一种急性高度传染性疾病。免疫预防是重要的防治手段，但影响免疫效果的因素有很多，诸如疫苗的质量、其他疫病的影响、强毒感染和变异株出现、免疫时间和免疫程序不当、鸡场环境卫生较差等。尤其是疫苗的保存温度对疫苗的效价影响最大。为此，我们对鸡新城疫疫苗设置不同温度刺激半小时稀释后免疫，以期找出解决影响免疫效果因素的方法和为疫苗合适的保存温度提供佐证材料。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1鸡新城疫（ND）冻干苗
来源于遵义市动物疫病控制中心。
1.1.2试验鸡群
来源于遵义市红花岗区深溪、南关两个镇蛋鸡、肉鸡6户养殖大户，共计6000羽。
1.1.3主要试剂
柠檬酸三钠、重铬酸钾、硫酸、0.9%生理盐水、PBS液。
1.1.4主要仪器与设备
96孔V型微量血凝板、单道和八道微量精密移液器、加样槽、吸嘴、微型振荡器、离心机、恒温箱。
1.2试验时间与地点
2009年12月，在深溪、南关两镇选定了蛋鸡、肉鸡养殖各3户进行鸡群免疫。实验室工作于2011年8～12月在红花岗区农牧局动物疾病控制中心实验室进行。
1.3影响疫苗免疫效果因素分析
1.3.1是疫苗检查不严影响免疫效果
（1）瓶盖检查。检查瓶盖是否松动、脱落。瓶盖松动、脱落的疫苗因其密闭保存条件改变会使疫苗的抗原性（免疫原性）降低进而导致疫苗的效价降低、失效甚至产生副作用。
（2）标签检查。检查标签上的生产批文批号、生产日期、疫苗性状、保存条件、保存时间、使用剂量。没有取得生产批文批号的疫苗质量不可靠；生产日期和保存时间的检查主要看疫苗是否超过保存期，超过保存期的疫苗效抗原性（免疫原性）降低或消失，进而导致疫苗的效价降低、效价差，甚至失效；保存条件是否与标签上规定的条件一致，不符合标签规定保存条件保存的疫苗，疫苗的抗原性（免疫原性）降低或消失，进而导致疫苗的效价降低甚至失效。
1.3.2疫苗保存不当影响免疫效果
（1）保存温度不当。保存温度过高要或过低均会使疫苗的抗原性（免疫原性）降低或消失，进而导致疫苗的效价降低甚至失效。
（2）保存避光不当。疫苗保存需要避光保存，如果避光条件不好也会使疫苗的抗原性（免疫原性）降低或消失，进而导致疫苗的效价降低甚至失效。
1.3.3疫苗使用操作不当影响免疫效果
（1）疫苗稀释不当。疫苗稀释不当有几种情况：不用规定的稀释液稀释疫苗；不按规定的稀释剂量稀释疫苗；稀释液与疫苗温差太大，会使疫苗的抗原性（免疫原性）降低或消失。
（2）疫苗使用不当。疫苗使用不当有几种情况：不按规定的使用方法使用；不按规定的使用剂量使用；使用器械、注射部位消毒不严。
（3）使用过程中保管不当。疫苗在稀释后使用过程中因保管不当，使稀释后的疫苗长时间置于强光或高温环境下会使疫苗的抗原性（免疫原性）降低或消失，（）进而导致疫苗的效价降低甚至失效。
1.4试验方法
1.4.1试验分组
将鸡新城疫（ND）疫苗从低温冰箱拿出后，分别在15～60℃（以5℃为梯度）恒温条件下保存30min后稀释进行免疫，从低温冰箱拿出后立即稀释免疫，并设空白对照组。试验总共12组。
1.4.21%红细胞悬液制备
由健康鸡心脏或翅静脉采血，放入加有抗凝剂的离心管内（按抗凝剂：全血=1：2的比例），迅速混匀。在离心机中以3000转/min离心5min，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加生理盐水，慢慢混合均匀，再在离心机中3000转/min离心5min，弃去上清液，再加生理盐水混匀，如此反复离心4～5次，最后一次离心后的红细胞，弃去上清液，即为红细胞泥。放入4℃冰箱中可保存2～3天。使用时用1ml吸管吸取0.1ml红细胞泥，然后加入9.9ml的生理盐水，此即1%红细胞悬液。现用现配。
1.4.3血清制备
每只鸡翅静脉采血0.5～1ml，静置待血清析出后或离心备用。
1.4.4血凝（HA）试验
①先用微量移液器向96孔V型反应板的每孔加生理盐水25l；
②用微量移液器吸取待测抗原25l于第一孔中并抽吸6次混合，后吸出25l至第2孔，依次倍比稀释到第11孔，弃去25l；
③微量移液器再吸取1%红细胞悬液依次加入各孔，每孔25l；
④置于微量振荡器上振荡1min后室温（18～22℃）静置30min观察结果；
⑤将反应板倾斜成45，沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒凝集。能使鸡红细胞完全凝集的抗原的最高稀释倍数，称为该抗原滴度红细胞凝集效价。即沉淀的前一孔即为该抗原的效价。
⑥4单位抗原校正，按逐级稀释的方法将抗原作相应稀释后的HA试验，当从第五孔开始为完全沉淀，所以表明所配4单位抗原准确。
1.4.5血凝抑制（HI）试验
每排孔检查1份血清。步骤如下：
①微量移液器先加25l生理盐水于各孔中；
②用微量移液器吸取待检血清25l置于第1孔中，然后倍比稀释至第11孔，弃去25l，最后一孔不稀释，为红细胞对照；
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鸡新城疫免疫失败的原因分析及防治方法
鸡新城疫是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病，是国家规定的一类动物疫病，具有很高的发病率和病死率，是养鸡业主重点防范的主要传染病之一。目前，对鸡新城疫病防控的根本方法是严格按照程序实施疫苗免疫，然而，在养殖过程中，养鸡业主虽然对鸡进行了疫苗免疫，但实际免疫效果并不理想。在临床上，仍然有温和型鸡新城疫病的发生，给养殖户造成了一定的经济损失。综其原因，主要是因为部分养殖户免疫方式方法不当等原因，导致免疫失败造成的。笔者结合多年的临床实践，对鸡新城疫免疫失败的原因进行综合分析。
1免疫失败原因分析
免疫时机把握不合理。雏鸡首免应在母源抗体下降至临界值时进行首免最为合适，这样可以避免母源抗体的干扰。具体来讲，一般在5～7日龄首免，二次加强免疫需在首免后的一个抗体生成期后进行免疫。首免用油佐剂疫苗免疫，应在首免21天后进行加强免疫。首免用冻干活疫苗免疫，应在首免14天后进行加强免疫；三免，应根据免疫抗体监测结果，在免疫抗体降低至临界值时进行免疫。部分养殖户不按照免疫程序进行免疫，往往会因母源抗体或免疫生成抗体的干扰，导致免疫效果不理想，甚至造成免疫失败。
免疫剂量把握不准确。使用冻干活疫苗免疫，鸡群首免剂量为1羽份，二次加强免疫为1.5羽份；使用油佐剂疫苗免疫，首免剂量为0.5羽份，二次加强免疫1羽份。但在实际免疫过程中，个别养殖户首次免疫即随意加大免疫剂量，这样，不但达不到理想的免疫效果，反而会因抗原过多造成免疫系统麻痹，产生免疫抑制。此外，个别养殖户在后期的加强免疫中，随意加大免疫剂量，盲目缩短免疫间隔时间，往往会导致鸡群免疫应答机能下降，免疫麻痹、免疫失败，甚至导致鸡群发生疾病。
免疫方式应用不恰当。一般情况下，冻干弱毒活疫苗的免疫方法为点眼、滴鼻、滴口、饮水和气雾等，冻干中毒活疫苗和灭活油佐剂疫苗的免疫方式只能是肌肉或者皮下注射，而部分养殖户使用冻干弱毒活疫苗和鸡痘疫苗联合进行皮下刺种，使用冻干中毒活疫苗饮水等，这些方法都是不正确的，使用冻干弱毒活疫苗皮下刺种，不能使鸡群产生有效的表面黏膜免疫抗体，免疫效果差。而使用冻干中毒活疫苗饮水，除了会增大鸡群的应激反应外，往往还会造成疫苗散毒，破坏鸡群的饲养环境。
免疫过程中使用抗免疫药物。冻干活疫苗是经过特殊制作工艺将原病毒弱化或者去除免疫抗干扰成分制成的，疫苗本身即为活病毒。若养殖户在免疫前24h内使用了消毒液对鸡体消毒，消毒液散落在饲料或饮水中经采食进入鸡体，或者鸡群吸人空气中雾化的消毒液，再者就是，在饲料或饮水中添加抗病毒药物，也会杀灭因免疫而进入鸡体内疫苗病毒而导致免疫失败。
鸡群本身带有免疫抑制性疾病。淋巴细胞性白血病、鸡传染性法氏囊病等都是免疫抑制性疾病。一旦感染这些疾病，都会导致鸡群本身的免疫系统不健全，免疫应答机能缺失。在这个期间，对鸡群进行鸡新城疫病的免疫，往往会因鸡群本身不能调节机体产生很好的免疫应答机能而导致免疫失败。
饲料及饲料添加剂发生霉变。长期大量饲喂霉变饲料及饲料添加剂，机体内存在大量的霉菌毒素，霉菌毒素会大大降低鸡群的免疫应答机能，在这种情况下，对鸡群进行鸡新城疫病的免疫，往往不能产生良好的免疫效果。
其他。使用劣质疫苗、过期疫苗、失效疫苗以及不能配合使用的疫苗同时或合并使用，疫苗毒株与当地流行毒株不匹配等，这些因素均会导致鸡新城疫疫苗的免疫失败，甚至严重时会造成免疫事故，给养殖户带来严重的经济损失。
2.防治措施
科学制定免疫程序并严格认真遵照执行。适时进行免疫抗体监测，依据免疫抗体监测结果来确定最佳的免疫时机。免疫前后72h内，不得对鸡群进行消毒，不得在饲料和饮水中添加抗病毒药物，否则会因药物破坏疫苗病毒而导致免疫失败。所有的疫苗免疫都必须遵循一个原则，就是只对临床健康的鸡群进行免疫，鸡新城疫病的免疫也不例外。当鸡群本身不健康，甚至感染有免疫抑制性疾病时，勉强对鸡群进行免疫，不但不会产生良好的免疫效果，反而会引发鸡群产生更加严重的病理反应。不得对鸡群饲喂霉烂变质饲料。长期饲喂霉变饲料，不但会破坏鸡体免疫，还会大大降低养殖户的生产效益。同时，也会增加引发鸡群患其他疾病的风险。养殖户在购买使用疫苗前，一定要仔细查验疫苗，重点看是否为合格厂家生产的合格疫苗，是否有农业部的生产批准文号、批号和生产日期，疫苗本身保存是否规范合理，是否有效。比如，油佐剂疫苗是否存在破乳分层、瓶装破裂；冻干活疫苗失去真空等现象。
鸡新城疫免疫失败的原因及解决办法
鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种高度接触性、急性、烈性传染病，各个季节、各种年龄的鸡都会发生，对养鸡业的危害极大。该病的发生和蔓延给养鸡生产造成很大的损失，而在鸡新城疫的免疫过程中，由于多方面的原因，往往造成鸡新城疫免疫失败。为此，笔者在这里将对鸡新城疫免疫失败的原因及对策进行分析。
1鸡新城疫免疫失败的原因
目前养鸡业中普遍存在使用疫苗后仍然发病的情况，经调查主要有以下几方面的原因：
1.1疫苗质量问题
鸡新城疫疫苗作为一种特殊的药品，对温度的要求极为严格。目前，国产的冻干苗需保存在-15℃以下，灭活苗需保存在2～8℃的环境中。在运输及储存过程中严防烈日暴晒，并要做到温度相对稳定，避免忽高忽低或反复冻融，否则将严重影响疫苗的效价甚至失效，而致免疫失败。
1.2稀释液的选用不当
除少数疫苗有其专用稀释液外，大部分鸡新城疫疫苗使用灭菌生理盐水、蒸馏水或凉开水来稀释。假若所选稀释液中含氯（如含有漂白粉的自来水），就会大大降低疫苗的免疫原性，从而导致免疫失败。
1.3首免日龄选择不当
若首免时间过早，母源抗体水平过高，疫苗就会被母源抗体中和，而达不到应有的效果；若免疫太晚，则有可能在疫苗产生免疫之前发生感染而发病。
1.4疫苗免疫的方法、剂量、种类选择不当
在饮水免疫时，不能用含有漂白粉及金属离子的水，应选择井水或将自来水煮沸沉淀后再用于稀释疫苗，或者在水中加入脱脂奶粉以保护疫苗病毒的活性。在饮水免疫时鸡群要先断水，夏天2～4h，冬天4～6h，并且放入足够的饮水装置，以保证每只鸡饮水均匀，在最短时间内饮完疫苗；疫苗剂量必须按要求使用，不能任意加大或减小。不同疫苗毒力不同，适用范围也不同，如Ⅰ系苗毒力较强；Ⅱ系苗毒力较弱；克隆30疫苗毒力中等；Ⅳ系苗使用安全，无毒副作用。应认真选择疫苗种类，并在发病较严重的鸡场，尽可能选用单苗。
1.5鸡群健康状况的影响
目前在雏鸡的早期疾病中，如鸡传染性法氏囊病对鸡新城疫免疫的影响很大，发生法氏囊病的鸡群即使进行了鸡新城疫免疫也仍可能发病。而有的机体有先天性免疫系统缺陷，如胸腺、脾脏等发育不全，或者免疫细胞缺乏，导致免疫系统对抗原的刺激不能产生正常的免疫应答，免疫反应不完全。还有部分疾病如法氏囊炎会引起机体免疫抑制，发生免疫抑制疾病的机体对疫苗的免疫不产生应答或应答下降，造成免疫失败。
1.6应激因素的影响
恶劣的环境条件（高温、高湿）或不良的饲养方式（通风不良、饲养密度过高、突然改变饲料）等都会对机体造成严重的应激反应。从而使机体的免疫活性下降，对抗原的刺激不能产生有效的免疫应答，影响免疫效果。
1.7免疫程序不合理
在鸡的免疫过程中，有的养殖场制定的免疫程序缺乏科学性，盲目照搬照抄大场、大户的免疫程序，忽视母源抗体和疫苗毒力对机体免疫的影响，随意提前或推后免疫，使得达不到应有的免疫效果。
1.8其它因素
器械消毒不严，如使用的器械注射器、针头、滴管等未消毒或消毒不严导致疫苗效价降低，器械中残留的消毒药会杀死活疫苗中的细菌或病毒，同样降低了免疫效果，引起免疫失败(/)；药物使用不当，任何一种药物都有一定的毒副作用，它不仅能破坏肠道菌群，而且还能导致免疫力下降，影响疫苗的免疫应答反应，如氯霉素、卡那霉素等；饲料中的有毒物质，如黄曲霉素能降低机体的抗病力，干扰免疫接种与体内获得性免疫。
2采取的主要对策
2.1正确选用疫苗
选购国家定点生产的优质疫苗。使用前首先检查瓶体有无裂缝、封口是否严密、是否在有效期内，如发现其中一项不合格，就严禁使用，并且在选用疫苗时要根据当地疫病流行情况、病毒毒株的强弱等选择适合本地区本场使用的单苗或多价苗。
2.2制定科学的免疫程序
通过对鸡群疫病及抗体水平的监测，制定适合本地区本场的免疫程序，并根据当地的气候、疫病流行等具体情况及时对免疫程序进行调整和完善。
2.3选择正确的免疫途径
严格按照疫苗的使用说明进行使用。选择适当的免疫方法，疫苗要做到现配现用。饮水免疫时严禁使用金属容器，不能使用含重金属元素或氯元素（使用含漂白粉的自来水）的水作稀释液，水中还不能含有消毒剂，饮水免疫前夏天先断水2～4h，冬天先断水4～6h，保证疫苗2h内饮完；滴鼻时，用左手指按住另一侧鼻孔，便于疫苗的吸收；胸部肌肉注射时，要求所选针头不能过粗，以防拔针时疫苗流出，注射时沿胸部肌肉30进针，以免刺伤胸膜和胸骨。
2.4提高饲养管理水平
在鸡的饲养过程中饲喂全价配合饲料，保证鸡在各个生长阶段的各种营养需要。不饲喂发霉变质饲料，做好日常管理工作，降低饲养密度，保证舍内空气流通，温度适宜，从而减少应激。在气温突然下降或在进行疫苗接种时，可在饲料或饮水中加入抗应激药物，如强力多维、电解多维、维生素C等，连续饲喂3～5d。但应注意的是在免疫前后2d内一般不使用消毒药、抗生素等药物。
2.5加强消毒
在鸡的饲养管理过程中，要长期准备3种以上消毒药，对场地和圈舍进行轮换消毒，每周消毒1～2次。但是注射器和针头应洗净、煮沸或高压灭菌，尽量不使用消毒剂，以防消毒剂的残留，且一个注射器不能混吸多种疫苗，吸出的疫苗严禁回注入瓶中。肌肉注射部位用75%酒精棉球消毒，以防局部感染。
2.6建立生物安全体系
养鸡场应建在地势高燥，水源充足，交通方便，远离学校和居民生活区的地方。建立养殖场生物安全体系：尽可能减少来访者数量；对进入鸡场人员提供完好的防护服，如长筒鞋、工作服、工作帽等；在场外建消毒间或消毒池，对进场的人员和车辆进行有效的消毒；对病鸡进行临床检查和死后剖解，定期进行诊断和监测，必要时采取血样进行抽样检查，便于早期发现，采取有效的防治措施；对鸡场排泄物和病死鸡进行无害化处理；对鸡场的环境和鸡舍进行定期消毒；从可靠来源地购买新鸡。
3结束语
鸡新城疫作为一种由病毒引起的急性败血性传染病，应重在预防，抓好饲养管理、卫生及隔离措施，找出免疫失败的原因并加以解决，使鸡群产生免疫，从而有效地预防本病的发生。
